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铜绿假单胞杆菌离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。关于细胞贴壁少的问题，冻存细胞解冻时1毫升细胞液要加10毫升－15m培养液，而培养基越少细胞越容易贴附。复苏细胞分装的问题，试验中复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。铜绿假单胞菌原称绿脓杆菌。南京CMCC(B)10104甘油菌制造商

保存的铜绿假单胞菌复苏时，直接从菌种保存管挑取少量细菌移种普通琼脂平板或肉汤管，于37摄氏度培养18~24小时。主要生化指标检测，取较低温甘油保存法和半固体保存法两种保存法保存的菌种分别进行42摄氏度生长试验、氧化酶试验、氧化-发酵试验、动力试验及明胶液化试验检测。半固体保存法在3个月内复苏，细菌生长良好，但在6个月后复苏，存活率降低，只达30%。移种普通琼脂平板上无肉眼可见的蓝绿色的色素产生，需连续移种3~4次后才可见到色素产生。改良的方法使菌种保存已达27个月，期间分别在6、12、18、24、27个月时复苏，均可见绿脓杆菌在普通琼脂平板上生长良好，可见圆形、大小不一、光滑、湿润、边缘不整齐的扁平菌落，菌落周围的琼脂被染成蓝绿色；细菌存活率为100%。南京CMCC(B)10104甘油菌铜绿假单胞菌主要产生青色的色素。

铜绿假单胞菌的液氮较低温保存法，将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中，密封于安瓿管内，然后控制冷却速度，使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时，即可置于-150摄氏度～-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物，都可用此法保存。微生物菌种应保藏于低温、清洁和干燥的地方，室温放置时问过长会导致菌种衰退；菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染，斜面菌种保藏时间通常为1-2个月，应根据菌种状况及时转接；冻干菌种保藏时间通常为5~10年；菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时更换新的菌种。

铜绿假单胞菌菌种在经冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次再用，另外安瓿管里大部份是用牛奶做为保护剂，里边菌体为少数，复苏时要全部菌悬液在新鲜培养基上，并在建议的温度下培养。铜绿假单胞菌菌种操作应在无菌条件下进行，转种完毕，废弃物应经灭菌再做丢弃处理，以名污染周围环境。铜绿假单胞菌复苏后，应根据菌种状况及时转接传代。铜绿假单胞菌产品质量稳定，创封闭管包装，冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。有着严格的质检程序，确保产品质量的稳定性。铜绿假单胞菌产品普遍使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业，疾控中心、质检局、出入境、药检局等等，得到普遍好评。铜绿假单胞菌在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。

利用较低温甘油保存法保存铜绿假单胞菌菌种时，要将保存的铜绿假单胞菌接种于1.7毫升肉汤管中，在37摄氏度恒温培养箱培养18小时后加人无菌甘油0.3毫升，使甘油浓度为15%，充分混匀，吸取1毫升分装于无菌的冷冻管或1.5毫升离心管，封好盖子，在-20摄氏度冰箱中放置3小时后，置-70摄氏度冰箱中长期保存。菌种复苏：从-70摄氏度冰箱中取出一只菌种保存管(已保存2年3个月)，迅速用接种环轻轻刮取几下，转种于已预温到37摄氏度的普通琼脂平板上，37摄氏度培养18~24小时。半固体保存法，要用接种针挑取少量菌苔移种于无菌半固体培养管，肉汤中加人琼脂粉至终浓度为0.25%，于37摄氏度培养18小时；用无菌方法将培养管的软木塞换为灭菌的橡胶塞后，放人菌种保存箱4摄氏度保存。在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。江西杆状铜绿假单胞菌

铜绿假单胞菌在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽。南京CMCC(B)10104甘油菌制造商

由于不同培养基的选择性存在差异，检测铜绿假单胞菌时，如有必要，采用不同培养基进行分离培养，可有效防止漏检现象的发生，提高检出率。绿脓菌素试验需加入氯仿将铜绿假单胞菌产生的色素溶出，此时可采用无菌操作将培养基捣碎，并适当延长浸泡时间，这样可使阳性结果更明显。因实验室温度存在差异，室温较低时明胶培养基呈凝胶状，室温较高时呈液体状，这是正常现象，不会影响明胶液化试验的结果。进行明胶液化试验时，在(35土2)摄氏度条件下明胶培养基呈液态，要判定试验结果必须将其置于(4~10)摄氏度冰箱中10分钟~30分钟，如明胶培养基仍为液态则明胶液化试验为阳性；如明胶培养基凝固，则明胶液化试验为阴性。南京CMCC(B)10104甘油菌制造商

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