Lambda核酸外切酶(LambdaExonuclease,简称λExonuclease)是一种具有特定特性和应用的酶,以下是其主要特点和应用:1.**特异性作用**:λExonuclease是一种5'→3'核酸外切酶,能选择性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的双链DNA。2.**酶切活性**:对单链DNA和5'端未磷酸化修饰的DNA的酶切活性较低,不能从DNA的切刻或缺口处起始消化。3.**嗜磷酸性**:该酶具有非常强的嗜磷酸性,磷酸化的核酸链与非磷酸化的核酸链的切割效率相差达200倍以上。4.**切割效率**:Lambda核酸外切酶是一种具有高度持续性的碱性核酸外切酶,可以连续地将核酸切割成为单个碱基,切割比较高速率可以达到1000nt/S。5.**应用领域**:-生成单链PCR产物用于DNA测序。-DNA单链构象多态性(SSCP)分析。-滚环扩增。-从双链DNA片段生成单链DNA。-PCR产物的克隆。-质粒制备净化。6.**酶活性定义**:Oneunitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoproduce10nmolofacid-solubledeoxyribonucleotidefromdouble-strandedsubstrateinatotalreactionvolumeof50μlin30minutesat37ºCin1XLambdaExonucleaseReactionBufferwith1μgsonicatedduplex[3H]-DNA。去泛素化酶可以去除泛素化标记,这一步骤是泛素化过程的逆转过程,它允许细胞对泛素化事件进行精细调控。Recombinant Mouse TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag
牛痘DNA拓扑异构酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)是一种来源于牛痘病毒的I型真核拓扑异构酶,具有以下功能和应用:1.**功能**:-牛痘DNA拓扑异构酶I可以催化双链DNA分子中单链DNA特定序列位置的磷酸二酯键的断开和连接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性,能够通过快速的酶切和连接使双链共价闭合环状的正或负超螺旋DNA发生解超螺旋,形成含有较少的正或负超螺旋的双链环状DNA分子。-能够使双链DNA形成绳结(knotting)或解开绳结(unknotting),联结互补的单链环状DNA成为双链环状DNA。2.**应用**:-作为一种DNA重组连接的新型工具酶,用于DNA载体和重组片段的连接、缺刻修复、接头连接等。-适用于TOPO克隆载体的制备、NGS建库中的接头连接等。-在TOPO克隆技术中,DNA拓扑异构酶I同时具有限制酶和连接酶特性,其生物学功能是在复制期间切割并重新连接DNA。3.**使用方法**:-用于DNA快速酶切流程,包括配制体系反应液、轻柔混匀、37℃孵育15分钟等步骤。4.**储存条件**:-建议在-25~-15℃保存,有效期为3年。5.**注意事项**:-避免起泡或剧烈搅拌、涡旋等操作,以防止酶失活。牛痘DNA拓扑异构酶I因其独特的功能,在分子生物学研究和基因工程中扮演着重要的角色。Mouse CDNF研究表明,优化后的Cas12a系统在多种细胞类型中表现出良好的编辑效率。
磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒在科研中的应用非常广,主要包括以下几个方面:1.**PCR产物的纯化**:磁珠法试剂盒可以从PCR反应液中回收不同片段大小的DNA,有效去除酶、dNTP、盐类等杂质,回收率高,产物纯度好,可以直接应用于PCR、连接、测序、NGS建库等下游实验。2.**基因组DNA的提取**:适用于从血液、唾液、口腔拭子和动物组织等样品中分离纯化高质量基因组DNA,提取的DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠,适合高通量工作站的自动化提取。3.**质粒DNA的提取**:磁珠用于从粗制的提取物中分离质粒DNA,通过精心优化的溶液将质粒DNA从基因组DNA和蛋白质中分离出来。4.**DNA片段的分离**:有许多类型的DNA分离试剂盒可供选择,包括DNA片段的分离。DNA片段可能需要为下一代测序协议进行分离,在这种情况下,可以用能选择分子大小的磁珠来分离片段。5.**自动化和高通量操作**:磁珠法试剂盒适合手工操作,也可用于自动化工作站或核酸自动提取仪,实现高通量操作。6.**分子生物学研究**:磁珠法试剂盒在基因组研究、分子进化研究等领域有广泛应用,为遗传病研究、筛查等提供了强有力的技术支持。
Cre重组酶在基因编辑中的操作主要涉及以下几个步骤:1.**识别与结合**:-Cre重组酶首先识别并分别结合两个LoxP序列的两个反向重复序列,形成一个二聚体。2.**四聚体形成**:-两个二聚体互相靠近,形成由四个Cre分子与两个LoxP位点结合形成的四聚体复合物。3.**DNA切割与交换**:-Cre重组酶在每个LoxP位点的间隔序列中引导单链切割,产生带有3’端羟基的断裂。每个LoxP位点的两个单链分别被切割。切割产生的自由3’端与对侧的3’端进行交换和重连,形成Holliday交叉结构。4.**分子重组与解旋**:-Holliday交叉结构通过Cre酶的作用被解旋并重组,形成新的重组产物。这个过程导致两个LoxP位点之间的DNA序列被删除、反转或易位,具体效果取决于LoxP序列的排列方式(方向和位置)。5.**条件性基因编辑**:-通过建立特异性Cre小鼠,该小鼠中的Cre重组酶由特定启动子驱动,可在特定细胞或组织或全身表达Cre重组酶。与带有Lox位点的Flox小鼠杂交,子代中可以获得既带有Cre又带有Flox基因的小鼠,实现条件性基因打靶(表达或敲除靶基因)。尽管Ultra-Long Master Mix设计用于长片段扩增,但在某些情况下,可能出现非特异性扩增,需要通过优化引物。
BstDNA聚合酶在等温扩增中的优势主要包括以下几点:1.**高灵敏度和扩增效率**:BstDNA聚合酶具有链置换能力,能够在恒温条件下快速、高效、特异性地扩增模板。翌圣生物的BstPlusDNAPolymerase灵敏度超高,低至5copies目的基因可测,且始终能比竞品更快达到阈值,扩增速率更快。2.**高dUTP耐受性**:BstPlusDNAPolymerase具有较高的dUTP耐受性,在反应体系中添加dUTP对BstPlusDNAPolymerase的灵敏度及扩增效率无影响,这使得它在防污染系统中表现出色。3.**快速扩增**:使用BstDNA聚合酶的等温扩增技术,如LAMP,可以在15-60分钟内实现109-1010倍的扩增,显示出快速的扩增能力。4.**热稳定性**:BstDNA聚合酶具有较强的热稳定性,能在60-65℃的恒温条件下保持活性,这使得它非常适合于不需要温度循环的等温扩增技术。5.**简化的反应设置**:Bst3.0DNAPolymerase优化了Loop-MediatedIsothermalDNAAmplification(LAMP)反应,简化了反应设置,可以实现单酶RT-LAMP反应。6.**抗抑制剂能力强**:Bst3.0DNAPolymerase即使在高浓度的扩增抑制剂中,包括dUTP,也能展现出强大的性能。
许多Probe qPCR Mix (2×)产品采用热启动DNA聚合酶,能减少非特异性扩增,提高反应的灵敏度和特异性 。Recombinant Mouse TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag
不同的DNA聚合酶在PCR中的应用差异主要体现在以下几个方面:1.**TaqDNAPolymerase**:是常用的DNA聚合酶之一,来源于Thermusaquaticus,具有较高的热稳定性及扩增效率。但它缺乏3'-5'核酸外切酶活性,即没有校正功能,因此其保真性相对较低。Taq酶适合扩增较短的DNA片段(通常不超过3kb),且在PCR产物的3'端带A碱基,可直接用于TA克隆。2.**PfuDNAPolymerase**:来源于Pyrococcusfuriosus,是一种高保真聚合酶,具有3'-5'外切酶活性,可以修复并纠正PCR反应中的腺嘌呤碱基误配,有效防止误差累积。Pfu聚合酶适用于需要高度准确的PCR扩增和DNA测序。3.**VentDNAPolymerase**:来源于Thermuslitoralis,具有中等保真度,比Taq聚合酶高两倍。它适用于GC含量高或复杂序列的PCR扩增,具有较高的热稳定性,半衰期可达6.7小时。4.**KODDNAPolymerase**:来源于Thermococcuskodakaraensis,具有高保真性和高热稳定性,保真性是Taq的约50倍,同时具有合成速度快的特点,聚合速度约为普通PfuDNAPolymerase的5倍,特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR产物。Recombinant Mouse TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag
磁珠法在基因克隆中的应用主要体现在以下几个方面:1.**质粒DNA的提取**:磁珠法可以用于从细菌细胞中提取质粒DNA,这对于质粒的克隆和表达至关重要。通过磁珠法提取的质粒DNA纯度高,适合用于后续的酶切、连接、转化等分子克隆步骤。2.**基因组DNA的提取**:磁珠法可以用于从各种生物样本中提取基因组DNA,这对于基因组的克隆和分析非常重要。提取的基因组DNA可以用于PCR扩增、基因表达分析、基因突变检测等。3.**mRNA的提取和纯化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和纯化mRNA,这对于cDNA的合成和基因表达分析非常关键。磁珠法提取的mRNA纯度高,可以用于后续的cDNA合成和...