荧光探针法是一种利用荧光标记的分子(即荧光探针)来检测和定量目标分子的方法。这种方法广泛应用于生物化学、分子生物学和医学诊断等领域。以下是荧光探针法的一些关键特点和工作原理:1.**荧光标记**:荧光探针是一类特殊的分子,它们含有可以发出荧光的化学基团(荧光团)。这些荧光团在受到特定波长的光激发时,会发出特定波长的光。2.**特异性结合**:荧光探针通常设计成能够特异性地与目标分子结合,如DNA、RNA、蛋白质或其他小分子。这种结合通常是通过分子间的互补性,如氢键、疏水作用或离子键等实现的。3.**信号变化**:荧光探针在结合目标分子前后,其荧光特性(如荧光强度、波长、寿命等)会发生改变。这种变化可以是增强或减弱,取决于探针的设计和环境条件。4.**检测原理**:-在**荧光共振能量转移(FRET)**中,两个不同的荧光团被设计成靠近,使得一个荧光团(供体)的能量可以非放射性地转移到另一个荧光团(受体)。当供体和受体之间的距离改变(如由于目标分子的结合)时,FRET效率会改变,从而影响荧光信号。-在**荧光增强或减弱**中,探针的荧光特性直接受到其与目标分子结合的影响。例如,某些探针在结合DNA后,其荧光强度会增强。来源于Francisella tularensis:FnCas12a是一种来源于Francisella tularensis菌株的核酸内切酶。Calcineurin Substrate
合成互补DNA(cDNA)的试剂盒是一种实验室工具,用于从RNA模板通过逆转录过程合成DNA。逆转录是一种酶促反应,其中RNA模板被逆转录酶(一种特殊的DNA聚合酶)读取,并根据RNA序列合成一条互补的DNA链。这个过程在分子生物学研究中非常重要,因为它允许科学家从RNA样品中获取遗传信息,并进行进一步的分析和应用。cDNA合成试剂盒通常包含以下关键组分:1.**逆转录酶**:一种特殊的酶,能够以RNA为模板合成DNA链。例如,M-MuLV反转录酶是一种常用的逆转录酶。2.**RNase抑制剂**:一种蛋白质,可以防止RNA样品在实验过程中被环境中的RNase酶降解。3.**缓冲液**:提供适宜的化学环境,保证逆转录酶的活性和反应的顺利进行。4.**dNTPs**:四种去氧核苷酸三磷酸(dATP、dCTP、dGTP和dTTP),是合成DNA链的原料。5.**引物**:短的单链DNA或RNA基础片段,用于启动cDNA的合成。常见的引物类型包括oligo(dT)引物(针对mRNA的poly(A)尾)、随机引物或特异性引物。6.**水**:通常是无核酸酶的水,以避免样品被污染。Recombinant Human CyP-DPfu DNA Polymerase 具有3'-5'外切酶活性,能够识别并切除错配的核苷酸,进一步提高扩增的准确性。
pA-Tn5转座酶是一种经过改造的高活性Tn5转座酶,与ProteinA融合,形成一种新型融合酶,应用于CUT&Tag技术中,用于研究蛋白质与基因组DNA的相互作用。这种融合酶具备以下特点:1.**高活性**:pA-Tn5转座酶是超高活性的突变形式,体外转座效率比野生型高1000倍。2.**ProteinA融合**:pA-Tn5转座酶的N端结构域为ProteinA的一部分,可以与免疫球蛋白的Fc区相互作用,特别是与大多数哺乳动物的IgG结合。3.**Tn5转座酶活性**:C端结构域为Tn5转座酶,能够特异性识别转座子两端反向重复的ME序列(MosaicEnd),并在形成转座复合体后随机插入靶DNA中。4.**应用广**:适用于CUT&Tag技术、高通量测序建库、ATAC-seq等,特别适用于早期胚胎发育、干细胞、以及表观遗传学等研究领域。5.**操作简便**:pA-Tn5转座酶的使用简化了实验步骤,可以在一步反应中实现DNA片段化和接头连接,从细胞到二代测序文库的转化过程需9小时。6.**低细胞投入量**:CUT&Tag技术允许从低至60个细胞的样本中获得结果,甚至可以应用于单细胞水平的研究。7.**高质量结果**:pA-Tn5转座酶的使用可以保证DNA片段化,同时获得的蛋白纯度高、核酸残留低。
5'DNA腺苷酰化试剂盒的单步反应是一种高效的酶促反应,用于在DNA分子的5'端添加一个腺苷酸(AMP)基团。这个过程通常涉及以下步骤:1.**准备反应混合物**:-根据试剂盒说明书,将所需的5'磷酸化的单链DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA连接酶(或其他腺苷酰化酶)、ATP和相应的缓冲液按比例混合。2.**孵育反应**:-将混合好的反应体系在指定的温度(通常是65℃)下孵育一定的时间,以允许酶将ATP中的AMP部分转移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反应完成后,通常在85℃孵育5分钟以失活腺苷酰化酶,这一步是为了防止后续的去腺苷酰化现象,确保反应的稳定性。4.**产物收集**:-由于转化效率高,通常不需要进行凝胶纯化步骤。可以通过乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA产物。5.**产物应用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后续的克隆、测序、连接或其他分子生物学实验。6.**注意事项**:-确保所有操作在无RNA酶和无DNA酶的环境中进行,以避免污染。-使用时需注意反应体系的准确性,确保底物、酶和ATP的比例适当。单步反应的优势在于简化了操作流程,减少了样品处理的复杂性,并且由于高转化效率,避免了耗时的纯化步骤,从而节省了时间和成本。FnCas12a的C端融合了核定位信号(NLS),有助于FnCas12a进入细胞后定位至细胞核,提高基因编辑效率。
5'DNA腺苷酰化试剂盒通过特定的酶催化反应,将5'-磷酸化的单链DNA(pDNA)转化为5'-腺苷酰化DNA(AppDNA)。以下是启用5'-磷酸化的单链DNA的一般步骤:1.**准备反应体系**:-根据试剂盒说明书,准备所需的反应组分,包括5'-磷酸化的单链DNA、腺苷酰化酶(如Adenylase或MthRNA连接酶)、ATP和相应的缓冲液。2.**混合组分**:-将5'-磷酸化的单链DNA与腺苷酰化酶、ATP和缓冲液混合在适当的反应容器中。3.**孵育反应**:-将混合好的反应体系在指定的温度(通常是65℃)下孵育一定的时间,以允许酶将ATP中的AMP部分转移到DNA的5'端。4.**酶失活**:-反应完成后,在85℃孵育5分钟以失活腺苷酰化酶,这一步是为了防止后续的去腺苷酰化现象,确保腺苷酰化比率不下降。5.**产物收集**:-由于转化效率高,通常不需要进行凝胶纯化步骤。可以通过乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA产物。6.**产物应用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后续的克隆、测序、连接或其他分子生物学实验。7.**注意事项**:-确保所有操作在无RNA酶和无DNA酶的环境中进行,以避免污染。-使用时需注意反应体系的准确性,确保底物、酶和ATP的比例适当。
Pfu DNA Polymerase 适合扩增较长的DNA片段,有助于在基因编辑中处理大的基因区域或复杂的基因结构。Calcineurin Substrate
磁珠法DNA凝胶回收试剂盒是一种用于从DNA琼脂糖凝胶中快速、高效地回收DNA片段的实验工具。它通常包含特异性吸附核酸分子的纳米磁珠和相应的缓冲液系统,能够去除杂质,得到高质量的DNA回收产物。这种试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收大小在100bp到30kb之间的DNA片段,回收效率通常可达70%左右。使用磁珠法DNA凝胶回收试剂盒的主要优势包括:1.操作简便快速,整个回收过程大约只需30分钟。2.无需离心,方便实现高通量和自动化的DNA回收。3.与柱式法相比,磁珠法对于长片段DNA的回收效率更高,可高出约20%。4.纯化得到的DNA可以直接用于酶切、连接、测序等后续分子生物学实验。磁珠法的操作过程通常包括以下步骤:1.将琼脂糖凝胶在融胶液中迅速融解,使DNA充分释放。2.DNA与磁珠特异性结合,通过磁分离快速高效地分离磁珠与溶液。3.经过洗涤去除杂质。4.使用洗脱液将DNA从磁珠上洗脱,获得高纯度的DNA样品。此外,一些试剂盒的说明书还会提供具体的操作步骤和所需材料的清单,包括磁珠、融胶液、洗涤液、洗脱液等组分,以及可能需要自备的无水乙醇和磁分离装置。在使用过程中,需要注意产品的保存条件和有效期,以及操作时的个人安全防护措施。Calcineurin Substrate
提取的DNA质量评估通常涉及以下几个方面:1.**纯度评估**:-**分光光度法**:通过测量DNA样本在260nm和280nm处的吸光度(OD值)来评估DNA的纯度。纯度可以通过OD260/OD280的比值来评估,对于纯DNA,这个比值通常在1.8左右。如果比值低于1.8,可能表明存在蛋白质污染;如果高于1.9,则可能存在RNA污染。此外,OD260/OD230的比值可以用来评估盐离子等杂质的残留,纯DNA的比值应在2.0-2.2之间。-**琼脂糖凝胶电泳法**:通过电泳分离DNA片段,根据DNA在凝胶上的迁移情况来评估其纯度。如果泳道口中存在较亮的条带,可能表明存在蛋白污染。2.**浓度评...