Endo H糖苷内切酶H:结构、功能及其在糖生物学中的应用摘要Endo H糖苷内切酶H(Endo H)是一种专门作用于糖链的内切酶,对研究蛋白质糖基化修饰具有重要意义。本文将探讨Endo H的结构特性、催化机制以及在糖生物学研究中的应用。引言蛋白质糖基化是一种普遍存在的翻译后修饰,对蛋白质的结构、稳定性和功能发挥着关键作用。Endo H是一种能够特异性识别并切割高甘露糖型N-连接糖链的内切酶,广泛应用于蛋白质糖基化分析。Endo H的结构特性Endo H由菌Helix pomatia分泌,其分子量约为130 kDa。该酶具有一个催化中心,能够识别并切割特定的糖苷键。Endo H的三维结构尚未完全解析,但其氨基酸序列和某些关键催化残基已被确定。催化机制Endo H通过水解N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)与N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)之间的β-1,4糖苷键,从而释放高甘露糖型N-连接糖链。该过程不涉及辅因子,表明Endo H催化机制可能依赖于其活性位点的氨基酸残基。在蛋白质表达体系中,肠激酶常用于切割融合标签,从而释放出目的蛋白,特别是在pET表达系统中。Recombinant Human NRG1 Beta 1 Protein,hFc Tag
提供来源于牛肺的抑肽酶(动物源性)。产品信息规格1mg/10mg产品性质来源(Source)大肠杆菌表达CAS号(CASNO.)9087-70-1外观(Appearance)白色、类白色、类黄色粉末溶解度(5mg/mlin0.9%NaCl)可溶,澄清或微浊纯度(Purity)≥95%(HPLC)蛋白含量(Proteincontent)≥60%酶浓度(EnzymeConcentration)≥3.0EPU/mgpro活性定义(ActivityDefinition)胰蛋白酶单位:每秒钟能水解1μmoL的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)为1个胰蛋白酶单位。酶活单位:能抑制1个胰蛋白酶单位的活力称为1个抑肽酶活力单位(EPU)。储存条件冻干粉2~8℃保存,有效期2年。使用方法抑肽酶与蛋白酶是等摩尔有效结合,推荐的结合pH>6.0,在pH<3.0的条件下不结合。可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃储存。One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus)PNGase F是一种酰胺水解酶,能够特异性地裂解糖蛋白中由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂型的寡糖。
牛纤维蛋白原:止血中的关键成分及生物医学应用摘要牛纤维蛋白原(Fibrinogen,Fg),也称为凝血因子I,是一种在血液凝固过程中发挥关键作用的血浆糖蛋白。本文讨论了牛纤维蛋白原的结构特性、提取方法以及各种生物医学应用,突出其在研究和中的重要性。引言牛纤维蛋白原是一种分子量较大的糖蛋白(约340 kDa),由肝脏的肝细胞合成。它在血液凝固的然后一步中起着主要作用,在那里它被转化为不溶性的纤维蛋白网,稳定了血凝块。该分子由两个相同的半部分组成,每个半部分包含三个多肽链(α、β和γ),通过二硫键连接。结构特性纤维蛋白原的结构完整性对其功能至关重要。每个分子的一半包含三个链(α、β、γ),具有不同的分子量(α约63.5 kDa,β约56 kDa,γ约47 kDa)和大约4%的碳水化合物。这些链通过二硫键相互连接,这对于维持蛋白质的构象和活性至关重要。提取和纯化已经开发了各种方法来提取和纯化血浆中的牛纤维蛋白原。传统方法包括盐析、色谱法和乙醇沉淀。盐析,特别是使用硫酸铵,是一种常见的方法,因其简单有效而受到青睐。然而,通过这些方法获得的纤维蛋白原纯度可能会有所不同,需要进一步的纯化步骤,如离子交换色谱法,以实现更高程度的纯化。
抑肽酶(Aprotinin),又称为抑蛋白酶肽,是一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可与丝氨酸蛋白酶形成稳定复合物并阻断酶的活性位点,这种结合是可逆的,大多数的抑肽酶-蛋白酶复合物在极端的pH<3.0的条件下解除结合。抑肽酶抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶,不能抑制Xa因子和凝血酶。从结构上来说,抑肽酶是一种来自牛肺的单体球状蛋白,由58个氨基酸组成并排列在具有三个交联二硫键的单个多肽链中。重组抑肽酶采用大肠杆菌表达,在GMP法规下生产,不含任何动物源成分,无动物源性的病毒污染,氨基酸序列与来源于牛肺的抑肽酶完全一致,具有与动物源性抑肽酶相同的酶学性质,可替代动物源性抑肽酶用于各种生物技术过程中,如:重组蛋白生产中抑制丝氨酸蛋白酶的活性;细胞培养等。全长A2aR蛋白可应用于免疫、ELISA、SPR(表面等离子共振)、BLI(生物层干涉)和细胞实验等场景。
重组型TEV蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH7.0,30℃时可达活性,但在pH6.0-8.5和温度4-30℃范围内皆有活性(见表1),使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。产品性质来源(Source)大肠杆菌外观(Appearance)无色透明液体比活力(SpecificActivity)5U/μL活性定义(UnitDefinition)在1×rTEVBuffer(50mMTris,pH8.0,0.1mMEDTA,1mMDTT)中,30℃反应1h,剪切>85%的3μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。纯化(Purification)Ni柱亲和纯化纯度(Purity)≥95%(bySDS-PAGE)产品组分运输与保存方法冰袋运输。分子胶降解剂通过诱导不同的Ub连接酶与目标蛋白之间的相互作用来促进目标蛋白的降解。Recombinant Mouse ICOS/CD278 Protein,hFc Tag
研究泛素-蛋白酶体途径:重组人泛素可用于研究泛素化修饰和蛋白降解过程。Recombinant Human NRG1 Beta 1 Protein,hFc Tag
RecombinantBiotinylatedHumanKIR2DL1Protein,His-AviTag性能参数分子别名(Synonyms)CD158A;CD158Ankat1;cl-42表达区间及表达系统(Source)BiotinylatedHumanKIR2DL1ProteinisexpressedfromHEK293withHistagandAvitagattheC-Terminus.ItcontainsHis22-Arg242.[Accession|P43626]分子量大小(MolecularWeight)TheproteinhasapredictedMWof27.1kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto48-60kDabasedonSDS-PAGEresult.(Endotoxin)Lessthan1EUperμgbytheLALmethod.纯度(Purity)>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC.制剂(Formulation)Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally8%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.重构方法(Reconstitution)Centrifugethetubebeforeopening.Reconstitutingtoaconcentrationmorethan100μg/mlisrecommended.Dissolvethelyophilizedproteinindistilledwater.储存条件Theproductshouldbestoredat-25~-15℃for1yearfromdateofreceipt.2-7days,2~8°Cundersterileconditionsafterreconstitution.Recombinant Human NRG1 Beta 1 Protein,hFc Tag
磁珠法在基因克隆中的应用主要体现在以下几个方面:1.**质粒DNA的提取**:磁珠法可以用于从细菌细胞中提取质粒DNA,这对于质粒的克隆和表达至关重要。通过磁珠法提取的质粒DNA纯度高,适合用于后续的酶切、连接、转化等分子克隆步骤。2.**基因组DNA的提取**:磁珠法可以用于从各种生物样本中提取基因组DNA,这对于基因组的克隆和分析非常重要。提取的基因组DNA可以用于PCR扩增、基因表达分析、基因突变检测等。3.**mRNA的提取和纯化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和纯化mRNA,这对于cDNA的合成和基因表达分析非常关键。磁珠法提取的mRNA纯度高,可以用于后续的cDNA合成和...