抑肽酶(Aprotinin),一种丝氨酸蛋白酶抑制剂,广泛应用于生物技术领域。本研究探讨了利用大肠杆菌(E. coli)表达系统生产重组抑肽酶的方法,及其在科研和工业生产中的优势。引言抑肽酶,又称胰蛋白酶抑制剂,是一种小分子蛋白,能有效抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶的活性。在生物制药、细胞培养和分子生物学研究中,抑肽酶的使用对于防止非特异性蛋白水解至关重要。传统的抑肽酶主要来源于动物,如牛肺,但存在外源病毒污染的风险。因此,利用大肠杆菌表达系统进行重组抑肽酶的生产,可以提供一种无动物源、高纯度、质量稳定的替代品。材料与方法基因克隆与表达载体构建:人源Ⅲ型胶原蛋白基因被克隆并构建到适合大肠杆菌表达的质粒载体中。大肠杆菌表达菌株的构建:通过转化,将构建好的质粒导入大肠杆菌宿主菌中,构建表达菌株。发酵培养:利用发酵罐进行大肠杆菌的扩大培养,以提升重组抑肽酶的产量。蛋白纯化:通过多次柱纯化获得高纯度的重组抑肽酶。透明质酸(Hyaluronic Acid,简称HA)是一种存在于人体和动物组织中的天然高分子多糖,称为糖醛酸或玻尿酸。Recombinant Cynomolgus CD31/PECAM-1 Protein,His Tag
透明质酸酶活力单位(Unitdefinition)基于USP透明质酸酶参照标准,即每分钟在37℃,pH5.7的2mL反应液中引起OD6000.330个变化定义为一个活力单位。抑制剂(Inhibitor)Fe2+,Fe3+,Zn2+,Cu2+,肝素,金精三羧酸,硫酸,硝酸,乙酰化透明质酸,硫酸纤维素酯,胆汁等结构式(Structure)运输和保存方法冰袋运输。-20℃保存,两年有效。溶液配制溶于0.02MPBS(pH7.0),含77mMNaCl和0.01%BSA,浓度为1mg/mL。现配现用。该产品储存液不稳定,使用时建议现配现用。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。Mouse GDF-7/BMP-12在某些疾病中,特定蛋白质的泛素化水平可能发生变化,因此,泛素化蛋白质可以作为疾病的生物标志物。
分子特性:牛凝血酶的分子特性符合高比活度酶的标准,纯度达到SDS-PAGE电泳无杂蛋白条带的要求。稳定性:牛凝血酶在室温下运输稳定,在2~8℃条件下可保存3年而酶活力未有变化。应用效果:在1:2000的质量比下,牛凝血酶能有效切割蛋白,适用于科研和工业生产中的重组融合蛋白特异性断裂。讨论科研应用:牛凝血酶因其高比活度和专一性,在分子生物学、生物化学和生物工程制药研究中作为工具酶具有重要价值。临床:作为止血药物,牛凝血酶在外科手术中的应用超过100年,因其简便和高效而受到青睐6。生产优势:牛凝血酶的生产稳定性好,纯度高,不含有其他蛋白酶活性,适合大规模生产和应用。
大肠杆菌系统通常是小分子细胞质蛋白或结构域表达的宿主。用大肠杆菌生产蛋白质,由于只需要简单的培养基和条件,因此费用低且方便。此外,除了无细胞表达,它是速度的系统,大肠杆菌倍增时间(约20min)比酵母(2h)、昆虫细胞和哺乳动物细胞都快。一般来说,在大肠杆菌中表达重组蛋白包括:1.将一个编码目标蛋白的质粒导入宿主菌;2.培养细胞至对数生长期;3.诱导蛋白表达。选择合适的表达载体合适的宿主选定后,相应的有许多工程化克隆位点和用于驱动蛋白表达的非编码序列的载体可用。启动子通常是可诱导的,以在细胞生长到合适的密度前阻止目标蛋白表达。大部分载体还提供目标蛋白与一系列蛋白标签构建融合蛋白的选择。常用的大肠杆菌表达载体分为以下两大类:E.coliRNA聚合酶转录的载体跨膜蛋白的表达与制备需要采用合适的表达载体、宿主细胞、培养条件和纯化工艺等方法,优化表达和纯化过程。
透明质酸酶,英文名称Hyaluronidase,一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称,结构上由4个相同亚基构成,每个亚基分子量接近14kDa,该酶是一种糖蛋白,包含5%的甘露糖和2.2%的葡萄糖胺。功能上该酶可随机裂解透明质酸、软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与胶原酶联合使用于降解细胞外基质,从而从组织中分离活细胞。本品来源于牛睾丸,活力值为400–1,000units/mg,合适的pH值为4.5–6.0。产品性质中文别名(ChineseSynonym)玻璃糖醛酸酶;玻璃酸酶英文别名(EnglishSynonym)Hyaluronoglucosaminidase;Hyaluronate4-glycanohydrolaseCAS号(CASNO.)37326-33-3来源(Source)牛睾丸分子量(MolecularWeight)~55kDa类型(Type)I-S外观(Appearance)淡黄色至米黄色至褐色粉末全长跨膜蛋白A2AR,也就是腺苷受体A2aR(ADORA2A),是一种七次跨膜蛋白,属于G蛋白偶联受体。Recombinant Human PLVAP Protein,His Tag
α-凝血酶在肝脏中作为非活性前体-凝血酶原合成,在凝血级联反应中被启用,这种活性酶由285个氨基酸组成。Recombinant Cynomolgus CD31/PECAM-1 Protein,His Tag
Trop-2,alsoknownasepithelialglycoprotein-1antigen(EGP-1),isaproteinthatinhumansisencodedbytheTACSTD2gene.Mutationsofthisgeneresultingelatinousdrop-likecornealdystrophy,anautosomalrecessivedisordercharacterizedbyseverecornealamyloidosisleadingtoblindness.产品性质别名EGP1;EGP-1;TROP2;GA733-1;gp50;T16;TACSTD2;TROP-2;M1S1;TACD2UniprotNo.P09758表达区间及表达系统RecombinantBiotinylatedHumanTROP-2/TACSTD2ProteinisexpressedfromHEK293cellswithHistagandAvitagattheC-terminal.ItcontainsHis27-Thr274.分子量TheproteinhasapredictedMWof30.5kDa.Duetoglycosylation,theproteinmigratesto46-55kDabasedonTris-BisPAGEresult.纯度>95%asdeterminedbySDS-PAGEandHPLC活性ELISAData:ImmobilizedAnti-TROP-2Antibody,hFcTagat0.5μg/mL(100μL/well)ontheplate.DoseresponsecurveforBiotinylatedHumanTROP-2,HisTagwiththeEC50of24.1ng/mLdeterminedbyELISA.0EUper1μgoftheproteinbytheLALmethod.制剂Lyophilizedfrom0.22μmfilteredsolutioninPBS(pH7.4).Normally5%trehaloseisaddedasprotectantbeforelyophilization.Recombinant Cynomolgus CD31/PECAM-1 Protein,His Tag
磁珠法在基因克隆中的应用主要体现在以下几个方面:1.**质粒DNA的提取**:磁珠法可以用于从细菌细胞中提取质粒DNA,这对于质粒的克隆和表达至关重要。通过磁珠法提取的质粒DNA纯度高,适合用于后续的酶切、连接、转化等分子克隆步骤。2.**基因组DNA的提取**:磁珠法可以用于从各种生物样本中提取基因组DNA,这对于基因组的克隆和分析非常重要。提取的基因组DNA可以用于PCR扩增、基因表达分析、基因突变检测等。3.**mRNA的提取和纯化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和纯化mRNA,这对于cDNA的合成和基因表达分析非常关键。磁珠法提取的mRNA纯度高,可以用于后续的cDNA合成和...