制备大肠杆菌感受态细胞的关键是什么?质粒DNA的质量和浓度:用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的,转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时,则会使转化率下降。一般地,DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%,1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言,分子量大的转化效率低,实验证明,大于30kb的重组质粒将很难进行转化。此外,重组DNA分子的构型与转化效率也密切相关,环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍,因此重组DNA大都构成环状双螺旋分子。金黄色葡萄球分布于自然界,如空气、水、土壤、饲料和一些物品上。瘤突毛壳菌株
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌表示,为一种常见的食源性致病微生物。该菌较适宜生长温度为37℃,pH为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在。金黄色葡萄球菌形态为球形,在培养基中菌落特征表现为圆形,菌落表面光滑,颜色为无色或者金黄色,无扩展生长特点,将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中,在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状,金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛,大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。创伤弧菌菌株铜绿假单胞菌在普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落。
铜绿假单胞菌低温保存法主要为简单保存法,将琼脂斜面孢子培养物、菌丝悬浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培养物置于4摄氏度冰箱保存,保存时间不超过1~2个月,若将谷物原料制备的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蜡,以隔绝外界空气和水汽,保持时间可达3~4个月。液氮较低温保存法,将生长稳定期的细胞悬浮在10%甘油或其他低冰点液体中,密封于安瓿管内,然后控制冷却速度,使安瓿管温度逐步下降至-35摄氏度时,即可置于-150~-196摄氏度的液氮罐中保存。大多数微生物如病毒、噬菌体、多种细菌、放线菌、酵母和原虫、特别是一些用冷冻干燥法有困难的微生物,都可用此法长期保存。
枯草芽孢杆菌能够分泌促进植物生长的活性物质,通过自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类,与其它植株体内酶协同发挥作用。同时,通过自身合成B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素,促进植物生长发育促进作物生长,有助于增产增收。枯草芽孢杆菌改良土壤主要表现在调节土壤养分、改变土壤微生物菌群结构、分解土壤残留农药等方面。施用枯草芽孢杆菌可以明显增加土壤碱解氮和磷含量、钾和全钾含量。衡量土壤肥力的重要指标有机质也能够在枯草芽孢杆菌的作用下,随菌剂用量的增加而明显增加,从而改善和调节耕层养分,利于作物生长所需营养的供给。铜绿假单胞菌为革兰氏阴性,不产芽胞。
大肠杆菌的生物学特征:1、理化特性大肠杆菌是短杆菌,两端呈钝圆形,革兰阴性。有时因环境不同,个别菌体出现近似球杆状或长丝状。大肠杆菌多是单一或两个存在,但不会排列呈长链形状。大多数的大肠杆菌菌株具有荚膜或微荚膜结构,但是不能形成芽孢。多数大肠杆菌菌株生长有菌毛,其中一些菌毛是针对宿主及其他的一些组织或细胞具有黏附作用的宿主特异性菌毛。2、生化特性大肠杆菌的生化代谢非常活跃。大肠杆菌可以发酵葡萄糖产酸、产气,个别菌株不产气,大肠杆菌还能发酵多种碳水化合物,也可以利用多种有机酸盐。大肠杆菌在常用的生化特性检测项目中,甲基红试验呈阳性,吲哚产生和乳糖发酵是阳性(个别菌株表现阴性),维-培试验是阴性,尿素酶和柠檬酸盐利用呈阴性(极个别菌株表现阳性),硝酸盐还原试验表现阳性,氧化酶表现阴性,氧化-发酵试验表现为f型。枯草芽孢杆菌对小麦赤霉病、纹枯病等病害的防治效果更佳。瘤突毛壳菌株
枯草芽孢杆菌绿色环保,对人畜无毒无害、不污染环境、对作物安全。瘤突毛壳菌株
铜绿假单胞菌原称绿脓杆菌。在自然界分布普遍,为土壤中存在的较常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有铜绿假单胞菌存在。铜绿假单胞菌存在的重要条件是潮湿的环境。铜绿假单胞菌的学名是Pseudomonasaeruginosa,当中的Pseudomonas是由希腊语的pseudo及monas所组成,意即虚假的单元,是早期微生物学用作描述病菌的。而Aeruginosa则是铜绿(即铜与空气中的氧气、二氧化碳和水等物质反应产生的物质,又称铜锈。化学式Cu2(OH)2CO3),正好表达了这种细菌所产生的青色的色素。绿脓素的生物合成是以群体效应来调控,就像充满囊肿性纤维化病人肺部铜绿假单胞菌的生物膜一样。瘤突毛壳菌株
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