金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.aureus)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌表示,为一种常见的食源性致病微生物。该菌较适宜生长温度为37℃,pH为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在。金黄色葡萄球菌形态为球形,在培养基中菌落特征表现为圆形,菌落表面光滑,颜色为无色或者金黄色,无扩展生长特点,将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中,在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状,金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛,大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。购买大肠杆菌时要货比三家,才能选到性价比高的大肠杆菌。白腐菌菌株
金黄色葡萄球菌的检验方法操作步骤:增菌培养法:(1)检样处理:按无菌操作取检样25g(ml),加入225mL灭菌生理盐水,固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。(2)增菌及分离培养:吸取5ml上述混悬液,接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪陈大豆肉汤50mL培养基内,36℃士1℃培养24h,转种血平板和Baird一Parker平板,36℃士1℃培养24h,挑取血平板上金黄色(有时为白色)菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。(3)形态:本菌为革兰氏阳性球菌,排列呈葡萄球状,无芽胞,无荚膜,致病性葡萄球菌菌体较小,直径约为0.5um~1um。红法夫酵母菌种在温度较低的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。
金黄色葡萄球菌免疫学检测方法:分子生物学检测方法:核酸探针技术:通过使用基因特异性核苷酸序列作为探针与目的DNA杂交的一种核酸杂交技术,通过检测该段特异性的标记物,从而判断是否含有目标微生物。核酸探针具有分子生物学检测技术的灵敏度高、特异性强的优点,但是实验周期长,操作繁琐,如果样品中目标微生物含量过低,极易造成样品目标微生物未检出,出现假阴性的实验结果。环介导等温扩增技术:该技术基于DNA扩增技术,能够在恒温条件下,根据设计的多对引物,利用链置换型DNA聚合酶快速的进行核酸的扩增。与PCR方法比较,环介导等温扩增法操作更加快捷简单,花费成本较低,且对仪器要求低,能够普遍利用在食源性致病微生物的检测中。
大肠杆菌检测方法:1、发酵法。这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养,该培养基含有荧光底物,需要培养24h。然后对荧光底物进行释放,需要采用葡萄糖醛酸进行,让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。采用这样的方式方法,还可以进行统计学估计原来样品中的菌落。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。2、滤膜法该方法主要过程:加入10mL左右的无菌水于滤器中,然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁,再进行过滤,将滤膜放在M-FC培养基中,两者之间不能够有气泡,然后进行密封,存放温度为44.5℃,存放时间约24h,直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。然后记录数据,估算每一单位的水溶液菌群数量,然后进行大肠杆菌量值的换算。枯草芽孢杆菌可提高动物体(人体)内干扰素和巨噬细胞的活性。
铜绿假单胞菌的固态发酵是一种培养基呈固态、培养基中没有或几乎没有自由流动水、利用自然底物作为碳源和能源或利用惰性底物作为支持物的发酵过程。但是工艺生产周期长;但是营养物质量浓度存在梯度,发酵不均匀,菌体的生长、对营养物的吸收和代谢产物的分泌存在不均匀,故目前不作为主要的工业生产方式。液固两相发酵是指,首先通过液体发酵快速生产大量高活力的菌丝体作为种子,再将其通过密闭管道,由压力釜接种到固体发酵罐中进行固体发酵,使其产生较接近自然接种体形态的孢子。铜绿假单胞菌的液态发酵是釆用现代发酵技术,将目标微生物菌种接种到生物反应器中进行通风的深层液体培养。枯草芽孢杆菌的芽孢形成后菌体不膨大。硫藤黄链霉菌菌株
铜绿假单胞菌中的原内毒养素蛋白质不只存在于不同血清型铜绿假单胞菌中。白腐菌菌株
大肠杆菌的耐药可以是天然固有的,也可以通过后天的基因突变、基因转移获得。固有耐药性(intrinsicresistance),即耐药性的产生并不依赖于抑菌药物的存在,而是细菌细胞所固有的,与细菌的遗传和进化密切相关。固有耐药性包括自发基因突变导致的耐药性和细胞膜药物外输作用引起的耐药性。获得性耐药(acquiredresis—tance)是指细菌在抑菌药物选择性压力存在下经过基因突变,或细菌在生长过程中由于移动耐药因子的转移而获得的一种表型。主要包括移动因子和抑菌药压力作用下引起基因突变所导致的耐药性。就目前的研究现状来看,大肠杆菌的耐药性机制主要有5种:①抗s素作用位点的改变或新作用位点的产生。②酶对抗s素的修饰和破坏。③增加抗s素从大肠杆菌向细胞外的主动排出作用。④细菌外膜通透性的改变。⑤质粒介导的耐药性。一种耐药机制可以对多种抗s素表现为抗性,同一种抗s素也常常出现多种耐药性机制共同抑制的现象。白腐菌菌株
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