加药时间:由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。培养液:加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。pH缓冲溶液有何用途：检测pH电极的性能。蔗糖咪唑溶液(2.25mol/L,pH7.0)
潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)>20ml产品购须知：1、报价含普票含运费。2、可根据用户提供配方生产配置，详情咨询客服人员。3、大包装需求用户可根据订单生产。4、院校研究所支持货到付款。院校单位订购流程：咨询客服确定产品→告知客服人员收货开票信息→确立合同→等待收货→转账付款潮霉素B溶液(Hygromycin B,50mg/ml)>20ml为什么选择我们：1、3000余种实验室试剂，2000余种中草药标准品以及农药标准品现货供应，方便您的一站式采购。2、提供产品专业定*务，标准品可根据客户要求的规格包装。3、科研院校单位支持先发货后付款，解除老师报账上的困扰，免去您对产品质量的后顾之忧4、专业的客服人员解答，消除您心中对实验试剂选择的各种不确定。5、完善的售后服务，解除您的后顾之忧。6、杜绝暴利，节约您的每一分科研经费！过氧化物酶封闭液(H2O2法)BMC原代分离步骤：抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液。
BMC原代分离步骤：1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液，加入PBS按1：1稀释血液（一般**管2mL+2mL）。2) 取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。3) 吸取稀释血液，在离分层液上方1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，并与分离液形成明显界面。4) 室温，离心2000rpm，20min。此时离心管中形成5层：较上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。5) 小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。加5倍以上体积的PBS洗2次，每次离心1500rpm，10min。
主要试剂配制：（1）PBS：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，高压灭菌，4℃保存备用。（2）RPIM-1640培养基：临用前根据需要加15%胎牛血清，较后按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）台盼蓝染液：称取4g台盼蓝，于研钵中用少量双蒸水研磨，加双蒸水至100mL，1500rpm离心15min，吸取上层液，即为4%水溶液。用前，用1.8%氯化钠溶液稀释1倍，即为2%台盼蓝染液。杀灭曲线的建立：按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上。
用亚甲基蓝溶液染色后，被染为深蓝色的部分是（细胞核）亚甲基蓝可以结合核酸，使细胞核呈蓝色。 台盼蓝能使死细胞着色机理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中较常用的死细胞鉴定染色方法之一。氨苄青霉素溶液配置：0.22μm滤膜过滤除菌，小份分装（1ml/管）后，置于－20℃保存。过氧化物酶封闭液(H2O2法)
每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。蔗糖咪唑溶液(2.25mol/L,pH7.0)
利福平注射液，适应症为本品用于不能耐受口服给药治好的急症患者，例如手术后的、昏迷的、胃肠道吸收功能损害的患者。结核病：本品与其他抗结核药联合使用，用于治好各种类型结核，包括初治、进展期的、慢性的及耐药病例。本品对大多数非典型的分枝杆菌菌株也有效。其它传染：本品可以治好难治性军团菌属及重症耐甲氧西林葡萄球菌传染。为预防被传染机体出现耐药性，本品应与适应相应传染的其它联合使用。从利福霉素B得到的一种半合成。能克制细菌DNA转录合成RNA，可用于治好结核病、肠球菌传染等。除作为应用外，在分子生物学中可用做从细菌中去除质粒的试剂。蔗糖咪唑溶液(2.25mol/L,pH7.0)
