细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存,可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来,这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞,可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种,起到了细胞保种的作用。为什么要进行细胞冻存?连续培养的细胞系容易发生遗传漂变,有限细胞系较终会发生衰老,所有培养的细胞都易受到微生物污染,即使运转情况较好的实验室也会遇到设备故障的问题。由于已建立的细胞系是一种宝贵资源,更换细胞系成本高昂,而且耗费时间,因此,十分有必要将细胞冷冻起来长期保存。除此之外,还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。程序降温冻存技术要点是慢冻,标准的冻存程序为降温速率-1~-2/℃ min。开封无血清细胞冻存液产品介绍
冻存细胞复苏方法:1.从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。2.待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1 ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9 ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。3.离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min),移去上清液。4.清洗细胞,充分洗净残留冻存液。5.加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。6.镜检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。开封无血清细胞冻存液产品介绍无血清快速细胞冻存液:含动物来源的血清成分,能够有效提高细胞冻存活率和复苏活力。
复苏方:法1)从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。2)待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1 ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9 ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。3)离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min),移去上清液。4)清洗细胞,充分洗净残留冻存液。5)加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。6)镜检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。
细胞冻存,我们应该注意哪些事项:1、冻存液比例一般是培养基:血清:DMSO=7:2:1或5:4:1;动物种属的原代细胞冻存液可采用的比例是培养基:血清:DMSO=0:9:1,即直接用血清重悬细胞再加入DMSO,尽管如此,原代细胞的复苏成活率还是很低。2、有文献表明,细胞以l℃/min的速度冷冻存活率较髙,因为这一速度可以很好的控制细胞内部晶体的产生。我们实际操作不可能将速度控制的这么精确,目前惯用的就是4℃30min、-20℃ 1h30min、-80℃ 2h后转入液氮中。无血清细胞冻存液使用方法:按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
细胞冻存液的作用是什么?渗透性冷冻保护剂:可以渗透到细胞内,一般是一些小分子物质,主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非渗透性冷冻保护剂:不能渗透到细胞内,一般是些大分子物质,主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷冻保护剂同溶液中的水分子结合,发生水合作用,弱化水的结晶过程使溶液的粘性增加从而减少冰晶的形成,同时冷冻保护剂可以通过在细胞内外维持一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,使细胞免受溶质的损伤。渗透性冷冻保护剂的保护机制是在细胞冷冻悬液完全凝固之前,渗透到细胞内,在细胞内外产生一定的摩尔浓度,降低细胞内外未结冰溶液中电解质的浓度,从而保护细胞免受高浓度电解质的损伤同时。细胞内水分也不会过分外渗,避免了细胞过分脱水皱缩。无血清冻存液用途:置于-20℃保存,有效期为3年。唐山无血清细胞冻存液供应商
无血清细胞冻存液存储条件:推荐将产品分装成小管后,再存放于4℃以下或-20℃冰箱冻存。开封无血清细胞冻存液产品介绍
无血清细胞冻存液是一种无血清细胞冻存液,通用于各种动物细胞株(tumour细胞和常规细胞),冻存细胞可在-80℃长期保存(>5年)。CELLSAVING配方成分明确,不含动物来源性蛋白,不含血清,可减少各类细菌、病毒和支原体等污染,保证冻存细胞的安全。细胞冻存液操作简便,无需程序降温,可在-80度或液氮中长期保存。相比于传统冻存液,埃泽思生物推出的此款冻存液可以明显增加细胞活力,稳定保持细胞特性,以及细胞多能性,并且可以稳定保持细胞的正常核型和增殖能力。细胞冻存液已经经过动物直接注射实验检测,包括静脉注射,皮下注射途径,无明显细胞毒性,动物安全性非常高。开封无血清细胞冻存液产品介绍
冷冻速率:冷冻速率是指降温的速度,直接关系到冷冻效果。冷冻速度不同,细胞内水分向外流动的情况也不相同,不同的冷冻速度既然能使细胞内发生不同的生理变化,也可以对细胞产生不同的损伤。超快速玻璃化冷冻对细胞存活来说是较为理想的冷冻方法。细胞内外呈玻璃化凝固,无冰晶形成或形成很小的冰晶,对细胞膜和细胞器不致造成损伤,细胞也不会在高浓度的溶质中长时间暴露而受损。不同细胞的较适冷冻速率不同。小鼠骨髓干细胞、酵母、人红细胞的较适冷冻速率分别为1.6℃/min、7℃/min和200℃/min。细胞与细胞之间的较适冷冻速率可在1.6℃~300℃/min,故对一种细胞进行冷冻保存之前,首先需要测定其较适冷冻速率,...