稳定转染细胞的筛选：1、转染48 h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤效果较好。但细胞过于稠密，其效率会降低，较好将细胞稀释至丰度低于25%。2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间（取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果）。4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5、后续更换正常培养基培养即可。杀灭曲线的建立：根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。Tris-BSA溶液(0.1mol/L,pH7.0)
注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得较佳的实验结果，较好在取样 2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验较好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。4.分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。Tris-BSA溶液(0.1mol/L,pH7.0)pH缓冲溶液有何用途：检测pH电极的性能。
两性霉素B溶液（10mg/ml）：注意事项：两性霉素B作用原理在于其与菌类细胞膜上的Ergosterol结合导致细胞膜通透性发生变化，使菌类细胞内钾离子、氨基酸通透到到膜外，破坏菌类正常代谢，进而使菌类细胞死亡。储存条件：4℃，避光，12个月。两性霉素B又称庐山霉素，是从链霉菌(Streptomycesnodosus)的培养液中分离而得的一种多烯类克菌类，其抑菌机制是能与菌类细胞膜上的麦角甾醇结合，导致细胞膜受损，通透性提高，细胞内物质外漏，破坏正常代谢而起抑菌作用。细菌因其细胞膜上不含麦角甾醇成分，故无效。两性霉素B克菌类谱广，几乎对绝大部分菌类均有效，耐药菌株少见，高浓度时呈杀菌作用。两性霉素B溶液在室温不稳定，易被光、热和酸破坏，在pH6.0～7.5下克菌作用很好。
氨苄青霉素为白色晶体或粉末，分子式是C16H19N3O4S,分子量为349.41。溶于稀酸和稀碱，微溶于水和甲醇，几乎不溶于氯仿、96%乙醇、、乙酸乙酯和固定油。无臭，味苦。抗革兰氏阳性及阴性菌，用于分子生物学和组织培养（防止微生物污染和抗性筛选）。氨苄青霉素时常被用于分子生物学上，作为细菌（如大肠杆菌）吸收基因（如质粒）的测试。测试会将一组基因，连同已编码抗氨苄青霉素的基因插入细菌中。该细菌会被放于充满氨苄青霉素的环境下培育，直至成功制造卞所需的基因。BMC原代分离步骤：抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液。
非变性PAGE蛋白上样缓冲液(2X) (Native Gel Sample Loading Buffer，2X)，, 是一种以溴酚蓝为染料的2倍浓缩液的非变性PAGE蛋白上样缓冲液，试剂中不含有SDS，DTT。可用于非变性的蛋白样品上样及其它分析。使用说明：1)按照1份蛋白样品加入1份非变PAGE蛋白上样缓冲液(2X)即1：1的比例混合，即可上样，电泳。2)通常电泳到当溴酚蓝染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。注意事项：1)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味。2)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)必须完全溶解后再使用。3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。pH缓冲溶液有何用途：检查仪器显示值和标准溶液的pH值是否一致。彩色显影液
固体试剂的取用:直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口，试管45度，并且缓缓地倒。Tris-BSA溶液(0.1mol/L,pH7.0)
G418溶液是什么：G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。溶液配制：G418溶液配制时，一般溶于水配成50mg/ml的原液，使用时再稀释使用。在筛选菌类和藻类时，一般用5mg/l 的浓度或者更低。筛选哺乳动物细胞是大可400mg/l的浓度。Tris-BSA溶液(0.1mol/L,pH7.0)
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