外泌体的提取、分离方法:聚合物沉淀法。聚合物沉淀法用于分离病毒和其他的生物大分子已有50多年历史,近几年,将其作为一种新的方法来分离外泌体。目前,市场已经有应用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌体的试剂盒,较常见的是SystemBiosciences公司的ExoQuick®和ExoQuick-TC®kits,该试剂盒操作简单不需要特殊的仪器,但是价格昂贵。提取外泌体的试剂盒主要成分是PEG8000(30%~50%),将试剂盒与体液或细胞培养液4℃孵育过夜,之后再低速离心。静置10~15分钟,留取沉淀物备用。长沙外泌体提取试剂厂家供应
当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。广州外泌体提取试剂单价以提取尿液中的外泌体为例,每次至少需要200毫升的尿液量。
用于外泌体提取的体液收集注意事项:1、选择血清还是血浆?推荐大多数研究选择血浆。血液凝固过程中血小板会产生大量外泌体,含量占血清中外泌体的50%以上,选择血浆可避免不必要的影响。2、注意抗凝剂的选择。肝素类抗凝剂与PCR假阴性有关,这可能是因为肝素与引物和/或酶有竞争作用。除了克制PCR,肝素可以与外泌体结合,阻止细胞摄取外泌体。因此需要记录肝素类药物的患者的血液样本。EDTA和双嘧达莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其释放外泌体。EDTA可能会干扰PCR反应(尽管其程度小于肝素),但是还是优于其他选择。此外,有研究表明钙螯合剂可在体外促进外泌体与血小板的结合从而降低经EDTA、或柠檬酸盐处理后的血液样本中外泌体的表观数量。使用肝素时这种影响就不会发生,因此建议在测量外泌体的精确数量时选用肝素。但是也有研究表明肝素可以导致体外条件下外泌体的减少。总之,目前尚需要更多的研究论证抗凝剂是否及如何对外泌体的释放,作用和下游反应产生特异性影响。
外泌体可通过流式、WB(检测指标有CD9,CD63,CD81)、电镜观察、NTA粒径追踪等手段检测,普遍应用于药物载体、疾病诊断marker、精细医疗、一些病症治病等方面研究。由于外泌体直径小,样本含量低,提取十分困难。已有的外泌体分离方式有密度梯度离心、超滤离心法、免疫磁珠抗体捕获、商用试剂盒等。但到目前为止,仍没有一种提取方法能同时保证外泌体的含量、纯度以及生物活性。外泌体是细胞间进行物质运输和信息交流的重要工具,可以通过调节免疫功能促进一些病症的增殖,血管新生和一些病症转移。与细菌传染,帮助细菌逃避免疫关系很大,并与心血管疾病,老年痴呆等疾病具有密切关系外泌体提取:高速离心沉淀外泌体。
大量关于一些病症相关巨噬细胞的研究表明,一些病症相关巨噬细胞通过与一些病症细胞进行细胞间通讯,与一些病症进展和转移相关,然而对TAM与一些病症细胞之间通信的研究限制于可溶性因子,例如促炎细胞因子,其中包括趋化因子、炎症因子和生长因子等。较近的研究证据表明,外泌体是一些病症微环境中不同细胞类型之间的重要通讯媒介。外泌体将信息从一个细胞传递到另一个细胞并重编程受体细胞。目前大部分研究都集中在一些病症细胞分泌的外泌体,关于TAM衍生的外泌体及其对治病细胞的影响知之甚少。TAM具有两种相反的表型:M1亚型巨噬细胞具有抗一些病症作用,M2型巨噬细胞具有致瘤作用活性。TAM的表型由特定的一些病症来源的趋化因子和外泌体调节。较近的一项研究表明,一些病症来源的外泌体miRNA调节一些病症促进M2巨噬细胞的极化。然而,TAM衍生的外泌体对一些病症进展和转移的调节尚未明确定义。目前,TAM的外泌体概况仍然大部分未知,并且TAM衍生的外泌体对于一些病症进展在功能上是否必需还未确定。可将外泌体吸附并分离出来。广州外泌体提取试剂单价
超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受?欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定,纯度也受到质疑。长沙外泌体提取试剂厂家供应
近年来,随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及一些病症治病领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域;临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。外泌体来源及内含物。几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体,同时外泌体也普遍存在于体液中,包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸(microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。外泌体鉴定。目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法:透射电子显微镜(TEM)、Nanosight、WesternBlot、流式细胞术。长沙外泌体提取试剂厂家供应
外泌体(exosome),特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有:肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、瘤细胞、间充质干细胞等。外泌体在免疫中抗原呈递、瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时,不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。细胞外囊泡是蛋白质、mRNA、miRNA和脂质运输来完成细胞间通讯通路的重要媒介,根据它们的大小和发生分为三类,包括外泌体、微泡和凋亡小体。其中,外泌体是直径大约为40-100nm的包装囊泡...