培养方法：1.体外分离获得瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes, TIL）。2.活化阶段：用培养液调节成1*106/ml接种于孔板中，加入IL-2（1000U/ml），在37℃，5%CO2条件下培养。注：一般培养的初期（7天左右）细胞无明显生长，为生长克制期。由于瘤本身固有的生物学特性、瘤抗原性及淋巴细胞浸润程度等，体外增殖前期会受到不同程度的克制；前期需尽快去除瘤细胞，如重量沉降法及贴壁去除法等，需具体情况具体分析。（前期处理有学者采用PHA、胰岛素、胰素等不同方法刺激）3.增殖阶段：细胞增殖到107后，用CD3单抗（30ng/mL）、CD28（30ng/mL），加入经180Gy辐射的健康供者PBMC（1*108）的培养瓶中，刺激第二天，加入IL-（4000U/ml）快速扩增。杀灭曲线的建立：根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。Unna碱性美蓝染色液
两性霉素B溶液（10mg/ml）：注意事项：两性霉素B作用原理在于其与菌类细胞膜上的Ergosterol结合导致细胞膜通透性发生变化，使菌类细胞内钾离子、氨基酸通透到到膜外，破坏菌类正常代谢，进而使菌类细胞死亡。储存条件：4℃，避光，12个月。两性霉素B又称庐山霉素，是从链霉菌(Streptomycesnodosus)的培养液中分离而得的一种多烯类克菌类，其抑菌机制是能与菌类细胞膜上的麦角甾醇结合，导致细胞膜受损，通透性提高，细胞内物质外漏，破坏正常代谢而起抑菌作用。细菌因其细胞膜上不含麦角甾醇成分，故无效。两性霉素B克菌类谱广，几乎对绝大部分菌类均有效，耐药菌株少见，高浓度时呈杀菌作用。两性霉素B溶液在室温不稳定，易被光、热和酸破坏，在pH6.0～7.5下克菌作用很好。木质素染色液(酸化苯胺法)杀灭曲线的建立：按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。
注意事项：1.全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得较佳的实验结果，较好在取样 2h内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验较好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。4.分离液用量大于组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。
说明检测试剂盒的具体规则：要确保微量加样器的准确性，能够运用蒸馏水和电子天平进行确认(因为蒸馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水能够看作是lg、200L的水能够看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其高量程和低量程进行确认。在运用微量加样器时，汲取不同瓶子中液体后要更换头，即便汲取规范品溶液。汲取液体时速度不易太快，检测试剂盒避免发生气泡，汲取的量不够准确。将液体加到酶标孔中时，避免头和孔内液体触摸，可使头上的液滴和孑L壁触摸，液滴会自然流下去。吸入液体时的的办法是吸两档打一档，避免因为头的毛细效果使得部分液体不能流出而形成的误差。BMC原代分离步骤：小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。
科研实验中试剂取用应注意事项：1. 固体试剂的取用:取用固体药品时药匙必须是干净的.一支药匙不能同时取用两种或两种以上的试剂.药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净,以备下次使用.药匙的两端为大小两匙,取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。2. 取用不定量(较多)液体——直接倾倒a. 瓶塞必须倒放在桌面上【防止药品腐蚀实验台或污染药品】；b. 直接倾倒时瓶口必须紧挨试管口，试管45度，并且缓缓地倒【防止药液损失】；c. 贴标签的一面必须朝向手心处【防止药液洒出腐蚀标签】；d. 倒完液体后，要立即盖紧瓶塞，并把瓶子放回原处，标签朝向外面【防止药品潮解、变质】。检测试剂盒使液体充沛混合均匀，也使其得到充沛的反应。α-乙酸萘酚酯酶染色液(α-NAE法)
固体试剂的取用:倒完液体后，要立即盖紧瓶塞，并把瓶子放回原处。Unna碱性美蓝染色液
微生物的培养特征是指微生物培养在培养基上所表现出的群体形态和生长情况。一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验不同微生物的培养特征。它们培养在斜面培养基上，可以呈丝线状、刺毛状、串珠状、疏展状、树枝状或假根状（图Ⅶ-6）。生长在液体培养基内，可以呈混浊、絮状、粘液状、形成菌膜、上层清晰而底部显沉淀状。穿刺培养在半固体培养基中，可以沿接种线向四周蔓延；或只沿线生长；也可上层生长得好，甚至连成一片，底部很少生长；或底部长得好，上层甚至不生长。利用微生物的培养特征，可以作为它们的种类鉴定和识别纯培养是否污染的参考。Unna碱性美蓝染色液
