DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料,常用荧光显微镜观测,可以透过完整的细胞膜,可用于活细胞和固定细胞的染色,其工作浓度一般为0.3mmol/L或0.1ug/ml。显微镜下可以看到蓝色荧光的细胞,荧光显微镜观察细胞标记的效率高 ,且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的大激发波长为340nm,大发射波长为488nm, DAPI和双链DNA结合后,大激发波长为360nm,大发射波长为460nm。固体试剂的取用:取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.2mol/L,pH9.16-10.83)
检测试剂盒检测成果分析办法:试验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度规范品的均匀OD值,复孔的变异系数应该小于20%。均匀OD值减去空白孔的OD值。制造规范曲线。以减去本底后的OD值为X轴,规范品的浓度为Y轴,运用作图软件得出一个适宜的计算办法。主张运用适宜的软件来作图,比方CurveExpert 1.4。这款软件能够给出许多种办法(比方直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中挑选一条*适宜的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据符合,能够将规范品的浓度作为未知数,将对应的OD值带入该方程,计算出规范品的浓度,得到的成果应该与实际浓度很挨近(+/-10%)。挑选拟合度的那条曲线。尿亚硝酸盐定性试验试剂(Griess试剂)试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。
溶故配制注意事项:1.药品要有较好的质皿试剂分为优级纯(保证试剂,Guaranteed reagent,G.R.),分析试剂(Antalytical reagent, A. R.)化学纯(Chemical pure,C. P.)和实验试剂(Laboratory reagent, L. R.)等等。化学试剂,杂质较多。只在个别情况下应用。如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。2.药品称且要精确。3.配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水,比电闭值在50万欧姆以上,PH在5.5-7.0之间才可应用,在组织培养等特殊用途时应注意此顶要求。配制一般化9k用溶液只要求用双燕蒸馏水或去离子水.4.配好后的溶液,应立即除菌处理(如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质),以防杂菌生长。
二甲基亚砜(DMSO):能与水、乙醇等溶剂任意混合,本品溶解范围广,具有皮肤给药的促渗作用。对皮肤有刺激性。乙醇:乙醇也是常用的溶剂。可与水、甘油、丙二醇以任意比例混合;具有较普遍的溶解性能。乙醇的毒性小。含乙醇20%以上即具有防腐作用,但乙醇本身具有药理作用。丙二醇:丙二醇的性质基本上同甘油相似,药用丙二醇应为1,2-丙二醇。丙二醇同样可与水、乙醇、甘油以任意比例混合,能溶解诸多有机药物,一定比例的丙二醇与水混合物可抑制某些药物的水解,增加稳定性。丙二醇水溶液对药物在皮肤及黏膜上有促渗作用。PBS:PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL,调pH7.2,高压灭菌,4℃保存备用。
如何降低检测试剂盒实验的误差概率?检验技师。应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。仔细阅读说明书。严格按照说明书要求进行规范化操作。检测试剂盒不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进。洗涤干净。洗板不干净,酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。普遍使用液体试剂的基本原理,因此液体试剂在药剂学上的应用具有普遍意义。氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率微板法)
磷酸缓冲盐溶液可以破坏生物蛋白的结构及生物特性。碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.2mol/L,pH9.16-10.83)
潮霉素 B使用方法:一、 储存液的配制(50mg/ml)称取1 g 潮霉素B(CH6362)用PBS(0.01 M)溶液或去离子水溶解,定容20ml。0.22μm滤器过滤除菌,分装于无菌冻存管,2-8℃冷藏,1年内稳定。或直接选购潮霉素B溶液(50mg/ml,CH6361)二、 工作浓度的筛选:潮霉素B用来筛选的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于开始次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定较佳筛选浓度。一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;菌类300-1000μg/mL。碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.2mol/L,pH9.16-10.83)