淋巴细胞分离液：淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异，借助离心产生的重力加速度，进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。分离原理：外周血中单个核细胞和单核细胞,其体积、形态和密度与其他细胞不同，淋巴细胞分离液是一种密度介于1.075~1.090之间而近似于等渗的溶液,用它做密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium（human, Ficoll-Paque ）是世界范围内用于体外研究分离人淋巴细胞的实验室公认的标准。固体试剂的取用:取固体量较多时用大匙,较少时用小匙。PET-32a(+)质粒
缓冲溶液的配制和应用：为了配制一定pH的缓冲溶液，首先选定一个弱酸，它的pKaφ尽可能接近所需配制的缓冲溶液的pH值，然后计算酸与碱的浓度比，根据此浓度比便可配制所需缓冲溶液。以上主要以弱酸及其盐组成的缓冲溶液为例说明它的作用原理、pH计算和配制方法。对于弱碱及其盐组成的缓冲溶液可采用相同的方法。缓冲溶液在物质分离和成分分析等方面应用普遍，如鉴定Mg2 离子时，可用下面的反应：白色磷酸铵镁沉淀溶于酸，故反应需在碱性溶液中进行，但碱性太强，可能生成白色Mg（OH）2沉淀，所以反应的pH值需控制在一定范围内，因此利用NH3·H2O和NH4Cl组成的缓冲溶液，保持溶液的pH值条件下，进行上述反应。D-Hanks平衡盐溶液(1×,无酚红)液体试剂分散度大，吸收快。
BMC原代分离步骤：1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液，加入PBS按1：1稀释血液（一般**管2mL+2mL）。2) 取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。3) 吸取稀释血液，在离分层液上方1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，并与分离液形成明显界面。4) 室温，离心2000rpm，20min。此时离心管中形成5层：较上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。5) 小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。加5倍以上体积的PBS洗2次，每次离心1500rpm，10min。
检测试剂盒实验经验分析：洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干（报纸就免了吧！）。洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存（洗液先用现配不费多少事的）。底物是光敏感的，要在临用前现配（同前，避光！）。检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触（终止液为硫酸，小心毁容）。待检样品要澄清，否则会影响结果。温浴时间应遵守检测试剂盒规定。应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。DC细胞诱导：将收集的PBMC在1640培养基，在37 ℃、5 % CO2条件下在培养板培养4h。
检测试剂盒样品收集:血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒液试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，血脂高样品。组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。BMC原代分离步骤：抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液。线虫快速脱水剂
检测试剂盒吸附性能好。PET-32a(+)质粒
单个核细胞分离步骤：Ficoll试剂混匀：首先将Ficoll试剂瓶颠倒多次混匀，使用注射器法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，插入注射器针头）或吸管法吸取Ficoll分离液（去掉聚丙烯盖，拉起铝环，拉开金属密封，移除银环。拿掉橡胶密封，无菌操作吸取需要的Ficoll分离液）。1.离心管加入3mLFicoll分离液。2.稀释过的血液样本小心铺到Ficoll分离液上面。注：缓慢加入样本，小心不要和Ficoll分离液混合，勿搅动。1.室温条件，水平转子离心400g，离心30-40min，可见细胞分层。2.用无菌吸管吸掉上层血浆和血小板，不要碰到单个核细胞层。3.无菌吸管转移单个核细胞层到无菌离心管。PET-32a(+)质粒
