加药时间:由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都回下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。这时药物浓度可以降至200ug/ml。培养液:加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞。这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。利福平溶液怎么配制：配制时每毫升可加入～5滴 10 N NaOH以助溶。原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑微板法)
用液体试剂时要注意什么？在试管里进行某些实验时，取试剂不需要准确用量，只要学会估计取用液体的量即可。例如用滴管取用液体，lmL相当多少滴，5mL液体占一个试管容量的几分之几等。倒入试管里溶液的量，一般不超过其容积的1/3。定量取用液体时，用量筒或移液管。量筒用于量度一定体积的液体，可根据需要选用不同容量的量筒。量取液体后读数时，要使视线与量筒内液体的弯月面的低处保持水平，偏高或偏低都会读不准而造成较大的误差。HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非无菌)固体试剂的取用:药匙每取完一种试剂后都必须用干净的纸擦拭干净。
说明检测试剂盒的具体规则:汲取液体时要选用量程和需要量挨近的微量加样器吸，削减误差。液体全部参加酶标孔后，将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s，使液体充沛混合均匀，也使其得到充沛的反响。孵育时要使盖板膜封好酶标板，避免水分蒸发，以防曲线不成线性。实验前的30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出，检测试剂盒使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同，酶标板只需取出所需量。因为底物显色剂对光及其灵敏，因而要避光保存。手艺洗板时每次参加洗涤液后。应静置15～30s，不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中，避免穿插污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
具体的检测试剂盒规矩说明操作方法：要确保微量加样器的准确性，能够运用蒸馏水和电子天平进行确认(因为蒸馏水不含杂质，温度环境为20%左右时，lmL的水能够看作是lg、200L的水能够看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其高量程和低量程进行确认。在运用微量加样器时，汲取不同瓶子中液体后要更换头，即便汲取规范品溶液。汲取液体时速度不易太快，以免发生气泡，汲取的量不够准确。将液体加到酶标孔中时，避免头和孔内液体触摸，可使头上的液滴和孑L壁触摸，液滴会自然流下去。吸入液体时的的方法是吸两档打一档，避免因为头的毛细作用使得部分液体不能流出而形成的差错。杀灭曲线的建立：按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上。
检测试剂盒说明：检测原理：选用双抗体夹心ABC-法。试剂盒保存：-20℃(较长时间不用时)；2-8℃(频频运用时)。浓洗刷液低温保存会有盐分出，稀释时可在水浴中加温助溶。中、英文说明书或许会有不一致之处，请以英文说明书为准。刚敞开的酶联板孔中或许会含有少量水样物质，此为正常现象，不会对实验效果形成任何影响。检测试剂盒优势：活络、特异的抗体；安稳的重复性和可靠性；吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；适用血清、血浆、安排匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。滴剂是指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的滴至动物的头、背等部位局部给药的液体试剂。水合氯醛溶液(50%w/v)
磷酸缓冲盐溶液可调整的适宜pH缓冲作用。原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑微板法)
非变性PAGE蛋白上样缓冲液(2X) (Native Gel Sample Loading Buffer，2X)，, 是一种以溴酚蓝为染料的2倍浓缩液的非变性PAGE蛋白上样缓冲液，试剂中不含有SDS，DTT。可用于非变性的蛋白样品上样及其它分析。使用说明：1)按照1份蛋白样品加入1份非变PAGE蛋白上样缓冲液(2X)即1：1的比例混合，即可上样，电泳。2)通常电泳到当溴酚蓝染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。注意事项：1)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)中含少量DTT和巯基乙醇，有轻微刺激性气味。2)SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(2X)必须完全溶解后再使用。3)为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑微板法)
