筛选：筛选之前:由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的适合筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/mL，在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同，一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围。而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定细胞对这一批G418的适合筛选浓度。尽管如此，特性明确的细胞系G418的适合用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的适合用量。检测试剂盒的特异性与检测试剂盒的要害组分，抗体对有关。碳酸氢钠溶液(7.5%)
怎样减少检测试剂盒误差？严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。注意检测试剂盒保存期，过保存期的试剂不能使用。评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。氯化钙溶液(2.5mol/L,无菌)检测试剂盒操作注意事项：实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
丁胺卡那霉素给药说明：（1）应监测血药浓度，尤其新生儿、老年和肾功能减退的患者，本品的有效治好浓度范围为15—25μg/ml，应避免高峰血药浓度持续在35μg/ml以上和谷浓度超过5μg/ml。（2）不能测定血药浓度时，应根据测得的肌酐除去率调整剂量。（3）给予开始饱和量（7.5mg/kg）后，有肾功能不全、前庭功能或听力减退的患者所用维持量酌减，即剂量不变，延长给药间期；或给药间期不变，每次剂量减少或停用本品。其维持量可按下式计算。①延长给药间期（小时）,每次用量不变（7.5mg/kg），给药间期=患者血肌酐（mg/100ml）×9或②减少每次给药量，每12小时用药一次：每次剂量=患者肌酐除去率（ml/min）×7.5（mg/kg）/正常人肌酐除去率（ml/min）。由于阿米卡星在体内不代谢，主要经尿排出，因此肾功能减退的患者可能引起药物积聚达中毒浓度。
G418溶液是什么：G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601，Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。Ｇ418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。溶液配制：G418溶液配制时，一般溶于水配成50mg/ml的原液，使用时再稀释使用。在筛选菌类和藻类时，一般用5mg/l 的浓度或者更低。筛选哺乳动物细胞是大可400mg/l的浓度。已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
检测方法的三大特点：稳定性好：包被的抗原的稳定性可使试剂盒的效期得到确保，早期以合成肽为包被抗原的试剂盒效期只有3-4个月，选用基因工程抗原后效期很大程度延长了。基因工程抗原将特异性抗原决定簇基因融合表达，表达产物包含更多的抗原决定簇，可提高试剂盒的灵敏度，提高检出率。分子量大：合成肽选用化学办法制备，因为工艺的限制，合成数量有限，只能达到数百个氨基酸。而使用基因工程制备的抗原，分子量更大。用EDTA2K离心搜集在真空血液搜集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。检测试剂盒以免疫学反应为根底。Gram碘液
PBS：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2，高压灭菌，4℃保存备用。碳酸氢钠溶液(7.5%)
稳定转染细胞的筛选：1、转染48 h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤效果较好。但细胞过于稠密，其效率会降低，较好将细胞稀释至丰度低于25%。2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间（取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果）。4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5、后续更换正常培养基培养即可。碳酸氢钠溶液(7.5%)
