标准物质的正确使用:不确定度表示被测量值的分散性,不同的标准物质其特性的不确定度也不同。在选择标准物质时应当考虑其对考虑其对预期分析结果要求的不确定度水平的影响。除生产者确定的不确定度外,标准样品的不同处理过程也会影响分析结果的不确定度,例如标准物质与分析样品基体之间有差异时,或使用与标准物质定值方法不同的分析方法时,可能其不确定度与生产者提供的会有差异。使用标准物质时,其不确定度并不是越小越好,还应当考虑供应状况、成本、预期使用的化学适用性和物理适用性。检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用。Tris-EDTA缓冲液(0.1×TE,pH8.0)
已知准确浓度的溶液,在容量分析中用作滴定剂,以滴定被测物质。如果试剂符合基准物质的要求 (组成与化学式相符、纯度高、稳定),可以直接配制标准溶液,即准确称出适量的基准物质,溶解后配制在一定体积的容量瓶内。可由下式计算应称取的基准物质的重量W:W=ΜV·基准物质的摩尔质量。式中Μ和V分别为所需配制的溶液的摩尔浓度和体积。利用上式可计算出标准溶液的浓度。如果试剂不符合基准物质的要求,则先配成近似于所需浓度的溶液,然后再用基准物质准确地测定其浓度,这个过程称为溶液的标定。Hanks平衡盐粉剂(1×HBSS,含酚红)PBS:PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL,调pH7.2,高压灭菌,4℃保存备用。
PH缓冲液:正常人血浆的pH值为7.35~7.45。血浆PH值的相对恒定性有赖于血液内的缓冲物质以及正常的肺、肾功能。血浆的缓冲物质包括NaHCO3/H2CO3、蛋白质钠盐/蛋白质和Na2HPO4/NaH2PO4三个主要的缓冲对,其中以NaHCO3/H2CO3较为重要。红细胞内还有血红蛋白钾盐/血红蛋白、氧合血红蛋白钾盐/氧合血红蛋白、K2HPO4/KH2PO4、KHCO3/H2CO3等缓冲对参与维持血浆PH值的恒定。当酸性或碱性物质进入血液时,血浆中的缓冲物质可有效的减轻酸或碱性物质对血浆PH值的影响,特别是肺和肾保持正常的排出体内过多的酸或碱的功能的情况下,血浆PH值的波动范围极小。
缓冲溶液的计算分为两大类:(1)已知共轭酸碱的浓度或质量,计算pH值。(2)已知pH值,计算配制时要满足的浓度和质量配制缓冲溶液时,有多种组合的方法,常见的有以下几种(1)两种溶液混合:如,NH3+NH4Cl溶液,NaOH溶液 +NH4Cl溶液,NH3+HCl溶液。(2)固体试剂+溶液:如,NH3+NH4Cl固体,NaOH固体 +NH4Cl溶液,HAc+NaAc固体。(3)两种固体试剂溶解混合:如,NaOH固体 +NH4Cl固体,Na2CO3固体+NaHCO3固体。由此可见,缓冲溶液的计算类型是很丰富的。实验中的配制一般是按共轭酸碱的量来称取或量取试剂后,再溶解混合到指定体积。但分析化学学习中的计算类型则可以演绎出十几种计算情况。在启用检测试剂盒之前,应重复检测阴性和阳性对照品和样品。
检测试剂盒样品收集、处理及保存方法:血清:使用不含热原和内毒液的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂空白吸光度是反映试剂质量的指标之一。核固红染色液(0.2%)
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时,有阻碍溶液pH变化的作用,称为缓冲作用。Tris-EDTA缓冲液(0.1×TE,pH8.0)
用液体试剂时要注意什么?在试管里进行某些实验时,取试剂不需要准确用量,只要学会估计取用液体的量即可。例如用滴管取用液体,lmL相当多少滴,5mL液体占一个试管容量的几分之几等。倒入试管里溶液的量,一般不超过其容积的1/3。定量取用液体时,用量筒或移液管。量筒用于量度一定体积的液体,可根据需要选用不同容量的量筒。量取液体后读数时,要使视线与量筒内液体的弯月面的低处保持水平,偏高或偏低都会读不准而造成较大的误差。Tris-EDTA缓冲液(0.1×TE,pH8.0)