G418又称遗传霉素,新霉素,对细菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳动物细胞具有氨基苷类毒性,对真核细胞进行筛选。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一种氨基糖苷类 ,这种氨基糖类的结构和新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似,在分子遗传试验中,是稳定转染常用的抗性筛选试剂。它通过克制转座子Tn601,Tn5的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞产生东西,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以普遍应用。注意事项:避免反复冻融。NTE缓冲液(1×,pH7.4)
pH缓冲溶液的类型与作用:pH缓冲溶液包括两大类:标准缓冲溶液和普通缓冲溶液。标准缓冲溶液主要用在酸度计测量溶液pH值时的仪器校正和定位,要求数值准确、精确。因此对试剂纯度、浓度准确性、温度等都有严格要求,这类缓冲溶液有专门的化学试剂商品,可以购买配制,也可以用优级纯试剂按资料的配比配制。普通缓冲溶液主要用于化学分析和仪器分析中要控制一定pH值的测定过程中。几乎所有的EDTA络合滴定都必须在一定的pH范围内进行,因此,需要加入pH缓冲溶液,例如,测定铅、锌用到HAc缓冲溶液,测定钙、镁、锌用到氨缓冲溶液。又如,氧化还原滴定中,碘量法测铜要用到NH4HF2,碘量法测砷、锑要加NaHCO3。NTE缓冲液(1×,pH7.4)注意ELISA检测试剂盒保存期,过保存期的试剂不能使用。
Laemmli 加样缓冲液(2×)是一种以溴酚蓝为染料的 2 倍浓缩的蛋白上样缓冲液,主要 由 2-ME、SDS、溴酚蓝、Laemmli 分层缓冲液等组成,可用于不连续蛋白电泳的上样。 组成: 编号 名称 PE0005 5ml Storage Laemmli 加样缓冲液(2×) 使用说明书 4℃ 1份 操作步骤(光供参考): 1、 取适量的蛋白样品和 Laemmli 加样缓冲液(2×)等量混合,充分混匀。 2、 直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可。 3、 通常电泳至蓝色染料到达 PAGE 胶的底部附近即可停止。 注意事项: 1、 Leagene Laemmli 加样缓冲液(2×)中含少量β-巯基乙醇,有轻微刺激性气味。 2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期: 12 个月有效。亦可室温短期保存。
检测试剂盒安全性:试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀检测试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发,避免长时间打开盖子。检测试剂盒以免疫学反应为根底。
液体固体试剂正确取用试剂的方法过程:如需少量液体试剂则可用滴管取用,取用时应注意不要将滴管碰到或插入接收容器的壁上或里面。为了达到准确的实验结果,取用试剂时应遵守以下规则,以保证试剂不受污染和不变质:试剂不能与手接触。要用洁净的药勺,量筒或滴管取用试剂,不准用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后,应将工具洗净(药勺要擦干)后,方可取用另一种试剂。试剂取用后一定要将瓶塞盖紧,不可放错瓶盖和滴管,绝不允许张冠李戴,用完后将瓶放回原处。已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内。固体试剂的取用:倒完液体后,要立即盖紧瓶塞,并把瓶子放回原处。百里酚酞指示剂(9.4-10.6)
检测试剂盒可在板孔中参加稀释液,再在其中参加血清标本。NTE缓冲液(1×,pH7.4)
检测试剂盒正确保存与操作办法?检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗刷液可能会有结晶分出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响成果。各步加样均应运用加样器,并常常校正其准确性,以防止试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,引荐运用排加样。请每次测定的一起做规范曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定,核算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。NTE缓冲液(1×,pH7.4)