筛选:筛选之前:由于每种细胞对G418的敏感性不同,而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同,所以在筛选之前,一定要确定G418的适合筛选浓度。具体如下:将细胞稀释到1000个细胞/mL,在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选,选择出在10~14天内使细胞全部死亡的低G418浓度来进行下一步的筛选试验。由于每种细胞对G418的敏感性不同,一般变动在100ug/ml~1000ug/ml范围。而且不同的厂家生产的相同浓度的G418的活性不尽相同,所以在筛选之前,一定要确定细胞对这一批G418的适合筛选浓度。尽管如此,特性明确的细胞系G418的适合用量还是稳定的。《分子克隆》给出了几个常用细胞系所需G418的适合用量。如果试剂符合基准物质的要求 (组成与化学式相符、纯度高、稳定),可以直接配制标准溶液。隐孢子虫卵囊染色液(金胺-酚法)
PH缓冲液:正常人血浆的pH值为7.35~7.45。血浆PH值的相对恒定性有赖于血液内的缓冲物质以及正常的肺、肾功能。血浆的缓冲物质包括NaHCO3/H2CO3、蛋白质钠盐/蛋白质和Na2HPO4/NaH2PO4三个主要的缓冲对,其中以NaHCO3/H2CO3较为重要。红细胞内还有血红蛋白钾盐/血红蛋白、氧合血红蛋白钾盐/氧合血红蛋白、K2HPO4/KH2PO4、KHCO3/H2CO3等缓冲对参与维持血浆PH值的恒定。当酸性或碱性物质进入血液时,血浆中的缓冲物质可有效的减轻酸或碱性物质对血浆PH值的影响,特别是肺和肾保持正常的排出体内过多的酸或碱的功能的情况下,血浆PH值的波动范围极小。黏液卡红染色液DAPI是一种能够与DNA强力结合的荧光染料。
检测试剂盒以免疫学反应为根底,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗刷除去剩余的游离反应物,从而确保试验结果的特异性与稳定性。运用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入,再与HRP符号的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,通过完全洗刷后加底物TMB显色。检测试剂盒TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线核算样品的浓度。
注意事项:1.全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得较佳的实验结果,较好在取样 2h内进行实验,样品存放时间越长,细胞分离效果越差。样品放置超过 6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。2.本实验较好不要使用高聚合材质(如聚苯乙烯)的塑料制品,应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品,因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面,影响细胞分离效果。3.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒 细胞数量增加。4.分离液用量大于组织单细胞悬液样本时,分离效果更佳。杀灭曲线的建立:按照每2天进行活细胞计数,来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。
SDS-EDTA 染料混合液(2.5×) 简介: SDS-EDTA 染料混合液(2.5×)是一种以溴酚蓝为染料的 2.5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液, 主要由 SDS、溴酚蓝、EDTA、蔗糖等组成,可用于蛋白上样。 组成: 编号 名称 PE0010 5ml Storage SDS-EDTA 染料混合液(2.5×) 使用说明书 4℃ 1份 操作步骤(光供参考): 1、 取适量的蛋白样品和 SDS-EDTA 染料混合液(2.5×)混合,充分混匀。 2、 直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可。 3、 通常电泳至蓝色染料到达 PAGE 胶的底部附近即可停止。 注意事项: 1、 SDS-EDTA 染料混合液(2.5×)中不含β-巯基乙醇。 2、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期: 12 个月有效。亦可室温短期保存。如需少量液体试剂则可用滴管取用,取用时应注意不要将滴管碰到或插入接收容器的壁上或里面。乙基橙指示剂(3.0-4.2)
室温条件,水平转子离心400g,离心30-40min,可见细胞分层。隐孢子虫卵囊染色液(金胺-酚法)
潮霉素 B(Hygromycin B) 是一种由吸水链霉菌产生的,能够克制细菌、菌类和 一些高等真核生物细胞内的蛋白质生物合成来。潮霉素 B 属于是氨基糖苷类,通过 克制蛋白质的合成来阻止微生物生长,对原核细胞与真核细胞都是克制作用。 Leagene Hygromycin B solution 常用于转基因实验的抗性筛选,筛选具有潮霉素 B 的抗性基因。 产品组成: 编号 名称 CA0012 CA0012 Storage Hygromycin B solution (50mg/ml) 使用说明书 10ml 20ml 1份 4℃ 避光 操作步骤(光供参考): 1、 根据实验具体要求操作。 2、 一般植物细胞筛选浓度在 20~200μ g/ml,动物细胞筛选浓度 50~1000μ g/ml,应根 据具体实验选择较佳筛选浓度。隐孢子虫卵囊染色液(金胺-酚法)