鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂,可用于细胞培养皿的包被,特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养;也可用于制备三维胶原凝胶,使细胞在模拟的三维环境中生长。制备鼠尾胶原方法:1、取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟;2、手持尾巴,用止血钳夹住鼠尾的较高,折断尾骨后拉出尾腱;3、将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡;4、重复步骤2、3,直至尾腱量够用;5、吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克);6、将尾腱置于平皿内剪碎,转移至三角烧瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、离心,4000转/分,10-15分钟;10、吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。石家庄鼠尾胶原厂家推荐
鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法。各个材料及其重量配比为鼠尾胶原蛋白∶聚乙烯醇∶壳聚糖为余量为水,采用冷冻干燥工艺制备。本发明所制备的止血材料主要采用鼠尾胶原蛋白制备,较传统的止血材料不可吸收、容易引起机体过敏、止血效果差等缺点,本发明所制备的止血材料具有人体内可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很强的亲水性;同时可启动血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,进而促使血浆结块阻止血流。同时,胶原表面的特定区域可以与细胞表面存在的类似纤连蛋白的糖蛋白结合,可以起到防止肠粘连的功效。宁波鼠尾胶原价格制备鼠尾胶原(两个同学一组操作)。
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原提取较佳工艺配比,酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳,而使用无花果蛋白酶时,0.01的配比较佳。
含细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/mL三维胶1mL为例)准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。加入760μL的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。本品在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。保存条件4℃保存,切勿冻存,有效期一年。胶原蛋白按其应用可以分为食品级、一般级、医药级。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿,培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三维环境中生长。1,在使用鼠胶原蛋白型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。1mg/ml浓度以上,pH左右时可形成具有一定强度的三维胶,检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。使用方法:1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格体积加到相应的培养器皿中。胶原蛋白是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分。南京鼠尾胶原哪家便宜
通常情况下骨质总量中的钙、镁、磷等无机物质光占总量的百分之几而胶原蛋白等有机物质却要占超过80%。石家庄鼠尾胶原厂家推荐
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。B.含细胞的三维胶原的制备(以配制200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10PBS10培养液,混匀(混匀后pH左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。注意事项型在室温下pH中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温。鼠尾肌腱胶原蛋白I(rattailtendoncollagentypeI)根据Birkedal-Hansen方法,经过醋酸(HAc)抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得。石家庄鼠尾胶原厂家推荐
鼠尾胶原备用胶凝程序:1)在冰上放置以下物品:胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1MNaOH。2)确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3)在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4)在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS(终体积/10)mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积(不要添加到管中直到步骤4.6为止)终体积x终胶原蛋白I浓度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的胶原体积×0.023)mL的无菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水:添加蒸馏水体积=V(终)—V(胶原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4....