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细胞转染的原理、操作步骤以及小技巧：脂质体转染操作步骤：(1)细胞培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。(2)转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)A液：用不含血清培养基稀释1ug质粒DNA。B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。(3)吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。(4)转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。(5)转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。(6)瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液。太原细胞高效转染试剂单价

转染的注意事项：有血清时的转染血清一度曾被认为会降低转染效率，但只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。转染过程在两步中需要使用培养基做为稀释液：在DNA-阳离子脂质体复合物准备过程以及复合物同细胞接触过程。在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。但在复合物形成后，在加入细胞中前可以加入血清。阳离子脂质体和DNA的较佳量在使用血清时会有所不同，因此如果你想在转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。大部分细胞可以在无血清培养基中几个小时内保持健康。对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一些营养丰富的无血清培养基，或者在转染培养基中使用血清。重庆细胞高效转染试剂哪家好转染试剂与细胞不匹配细胞转染较适合的不是原代细胞。

细胞电转染实验的几点建议：1.电场强度要合适合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的较佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的较佳电场强度。2.细胞状态要好用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定期的细胞差，电转后，细胞膜的恢复能力强，而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.

瞬时转染和转染效率的监测：基因的瞬时表达在24-72小时内就结束了。这种快速的瞬时表达非常适用于验证质粒表达和监测转染步骤的效率。可以使用报告基因来确定优化条件，其表达蛋白易检测，在目的细胞中不含此蛋白或水平很低。常用的报告基因包括氯霉素乙酰转移酶（CAT），绿色荧光蛋白（GFP），荧光素酶（Lux或Luc）以及b-半乳糖苷酶（b-gal）。可以使用简单的非同位素方法检测b-gal的表达以测定转染效率和活性。pCMVSPORT-bgal质粒包含CMV启动子调控下的LacZ基因，转染入真核细胞内后可以直接表达bgal。结合简单的检测步骤，可以做为监测转染条件的一种方便灵敏的方法。在瞬时转染质粒中往往都含有一个报告基。

如何有效提高细胞转染实验效率：1.选择合适的转染试剂不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择较适合实验设计的转染试剂。当然，较适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。2.保持较佳的细胞状态一般低的细胞代数（<50）能确保基因型不变。较适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，细胞生长旺盛，较容易转染。细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变，总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。也就是说同一种系的细胞株，在各实验室不同培养条件下，其生物学性状发生不同程度的改变，导致其转染特性也发生变化。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复较佳结果。对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。徐州昆明细胞高效转染试剂

总染色体重组或基因调控变化等而演化。太原细胞高效转染试剂单价

细胞转染的常用方法：细菌转染：原理：对于用脂质体不能实现转染的细胞，可以采用细菌转染。可用于蛋白质过表达或克制，是临床研究中较常用的方法。它通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中，可用于难转染细胞、原代细胞的稳定性转染。实验步骤：通过基因克隆生成重组细菌→采用非细菌法转染包装细胞系，扩增并分离得到重组细菌颗粒→纯化并滴定细菌液→转导目的细胞（含有细菌特异性的受体）→去除培养物中的细菌，并加入新鲜培养基→分析细胞瞬时基因表达或沉默情况。太原细胞高效转染试剂单价