含乙二醇基的多糖经过碘酸氧化,产生醛基,与雪夫(Schiff)试剂中无色品红结合,形成紫红色沉淀物定位于含糖原的胞浆中。该反应称为碘酸-雪夫(PAS)反应。(1)雪夫液配制:碱性品红1g溶于200ml沸水中,冷却60℃时过滤,加1mmol/L盐酸20ml,再冷却至25℃左右,加偏重亚硫酸钠(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗处24h,无色即可放冰箱中保存,呈微红色,则加活性炭1~2g,吸附过滤使成无色液体,放冰箱中保存。若溶液变红,即不能再用。(2)10g/L过碘酸水溶液:过碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸馏水至10ml。溶解后盖紧放冰箱备用,一般可用3个月,变黄则失效。糖原染色试剂盒。切取材料时刀要锐利,避免因挤压细胞使其受到损伤。北京哪家提供糖原染色试剂盒生产厂家
PAS染色试剂配制及染色方法:1.材料与方1.1 实验材料新鲜小白鼠肝脏、肾脏标本各30例,均来自我室实验材料。1.2 主要试剂1.2.1 AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液,其配方:无水乙醇80mL,冰醋酸5mL、甲醛10mL。1.2.2 Carnoy固定液 氯仿300mL,冰醋酸100mL,95%酒精600mL。1.2.3 过碘酸溶液 0.5g过碘酸(HIO)溶于100mL蒸馏水或者70%酒精溶液中,或者按如下配方配制:过碘酸0.8g,95%乙醇70mL,醋酸钠0.27g,水20mL。待溶解后置于4℃冰箱避光保存。1.2.4 无色品红液(Schiff氏液) 在三角烧内加入蒸馏水500mL,煮沸后,在保持微沸的情况下,加入碱性品红2.5g,并不断摇动约5min(勿使之沸腾),使碱性品红彻底溶解(溶解液为深红色)。冷却到50℃时,过滤,加入1N盐酸50mL,再待冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠2.5g,塞住瓶口,摇动容器以充分混合(此时颜色明显变淡),然后避光放置或冰箱内24h北京糖原染色试剂盒平均价格糖原在肝脏及心肌疾患及某些的病变中分布和量都有一定改变。
注意事项:染色时:①染色时必须严格按照染色操作说明书进行染色。②在染色过程中,前一个染液浸染完成后,在进行下一个染液的步骤之前,必须彻底充分水洗,使前一个染液冲洗干净后再进行下一步骤。③每次滴加染液前,务必吸干组织上多余的水分,避免多余的水把染液稀释了,造成染色不佳。④在滴加染液时,务必使染液完全覆盖组织,但不能溢出圈外,避免浪费试剂。在染色时,用有色铅笔在组织周围划一个圈,这样在滴加染液时就不会使染液溢出。
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蜡切片脱蜡至水。(2)0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液(过碘酸再结晶应重新配制使用)。(3)蒸馏水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分钟。(Schiff氏液从冰箱取出升至室温使用)(5)流水冲洗10分钟。(6)苏木素浸染细胞核2-3分钟。(7)脱水、透明、封盖。结果:糖原呈红色,细胞核呈蓝色。试剂配制:(1)0.5%过碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏试剂。碱性品红1g蒸馏水200ml1N盐酸(98.3ml比重1.16盐酸,加入蒸馏水成1000ml)20ml偏重亚硫酸钠或钾1g碱性品红1g加入200ml蒸馏水,搅拌加热沸腾,待冷却至50℃过滤,加入当量盐酸至25℃时加入偏重亚硫酸钠。置于暗处,两天后溶液变桔黄色或草黄色,然后加入少量活性碳并震荡、过滤,此时溶液应为无色。保存冰箱备用。溶液如显浅红色或草黄色,染色效果较差~0.5%过碘酸水溶液5分钟。或1%过碘酸95%酒精溶液。
糖原及粘液染色法注意事项:1、糖原的固定要及时,而且标本要新鲜。2、如用无水酒精作糖原的固定剂,有它的弊病,因无水酒精渗透较慢,而且容易产生极化,(极化是糖原颗粒趋向于细胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果较佳,其配法如下:苦味酸饱和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各种试剂必须化学纯,亚硫酸钠须有浓厚气味,器皿必须洁净而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏试剂,在经过活性碳吸附漂白后不显无色,首先应考虑试剂中的偏重亚硫酸钠是否失效。如果偏重亚硫酸钠气味不浓,使用时可考虑适当的增加用量。其次考虑碱性品红本身,常常虽属同一生产厂家,但不同批号,其效果就可能不同,应特别引起注意可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。湖南哪家提供糖原染色试剂盒厂家供应
自早幼粒阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。北京哪家提供糖原染色试剂盒生产厂家
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:尽可能选取小块新鲜组织及时固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前决不能用水或生理盐水等浸洗。应避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能较好地保存糖原,但有使糖原流动到细胞一侧的现象,多数人认为是由于固定剂把细胞内的糖原推向固定剂对组织浸透的方向而造成。其他组织应用中性福尔马林固定为佳。组织在4℃左右温度内固定与保存,是针对糖的性质和避免糖原溶于水而采取的相应措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能 白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此较好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳北京哪家提供糖原染色试剂盒生产厂家
染色试剂盒:GUS基因就是β-葡萄糖苷酸酶基因(β-glucuronidase),是从大肠杆菌K-12菌株分离出的一种酸性水解酶。该基因产物为β-葡萄糖苷酸酶,属水解酶类,相当稳定而不易降解,以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物,其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性,因此这个基因被普遍应用于基因调控的研究中。根据GUS基因检测所用的底物不同,可以选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(灵感度为分光光度检测法较高)。其中较为常用的是组织化学法。拥有千锤百炼的专业人才队伍,保证实验快速、有效的完成。如何使用糖原染色试剂盒生产厂家染色的一般原则:1.荧...