鼠尾胶原,10mg包装,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超纯水至100ml,容量瓶配制比较准确。2.用吸管吸取10ml刚配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z准确),加入盛胶原的瓶中,轻轻颠倒,不要震荡,蛋白容易起泡。几分钟即可,蛋白质非常好溶解。3.将胶原溶液移入事先压好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大点的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一档就行,避免加入气泡。然后4度过夜除菌。4.第二天将上层胶原溶液分装进EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷冻。制备鼠尾胶原:将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡。上海鼠尾胶原厂家
鼠尾胶原:鼠尾胶原是一种天然培养基和一种天然的黏附剂。实验设备及材料:大鼠尾巴、剪刀、镊子、止血钳、弯头吸管、平皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、天平、生理盐水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、盖玻片、培养瓶、钻石笔、鼠尾胶原。实验内容:1、制备鼠尾胶原(两个同学一组操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾胶原将小玻片固定于培养瓶内。制备鼠尾胶原:1、取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟;2、手持尾巴,用止血钳夹住鼠尾的,折断尾骨后拉出尾腱;3、将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡;4、重复步骤2、3,直至尾腱量够用;5、吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克);6、将尾腱置于平皿内剪碎,转移至三角烧瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、离心,4000转/分,10-15分钟;10、吸取上清,分装成小瓶,4℃保存。上海开封鼠尾胶原将尾腱剪断置于平皿中,生理盐水浸泡。
鼠尾Ⅰ型胶原:选择适当的骨修复材料是治好骨缺损的中心环节。目前,临床上常用的有人工骨移植、自体骨移植和同种异体骨移植。其中,人工骨材料多为磷酸三钙、半水硫酸钙等含有钙和磷的无机矿物材料[1-2],由于不含自体骨组织中的有机大分子Ⅰ型胶原蛋白,其临床疗效远远低于自体骨组织。但是,自体骨移植和同种异体骨移植均来源于人类自身骨组织,数量有限,难以满足临床需要。因此,研发与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料,成为全世界骨组织工程学者孜孜以求的目标。由于天然骨组织是Ⅰ型胶原蛋白和羟基磷灰石钙生物矿化的产物,在分子结构上,羟基磷灰石钙晶体是以Ⅰ型胶原纤维为模板,呈片状镶嵌在胶原纤维分子间隙,沿着胶原纤维的长轴纵向矿化生长。本研究仿生天然骨组织的分子结构,酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型胶原蛋白,重构形成Ⅰ型胶原纤维,然后将Ⅰ型胶原纤维放置在矿化液中模拟人体内骨生物矿化,通过透射电子显微镜(TEM)和电子衍射观察羟基磷灰石钙晶体在胶原纤维内部的骨生物矿化。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明:含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。制备鼠尾胶原:取大鼠尾巴洗净,75%酒精浸泡5分钟。
鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用:胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2诱导。24h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论:两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值明显降低,呈剂量依赖性。鼠尾胶原蛋白用于生产明胶并添加到布丁和棉花糖中。成都正规鼠尾胶原直销价
鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶作为基质包被培养器皿。上海鼠尾胶原厂家
I型鼠尾胶原是借鉴NavneetaRajan,JasonHabermehl法,经过乙酸抽提、离心、灭菌、透析等步骤制备得到的高纯度、高活性胶原蛋白,属于医药级别产品,可用于包被细胞培养器皿(单分子层包被),适合多种类型细胞的贴壁如肝脏细胞、神经节细胞、胚胎细胞、肌细胞、肺细胞、神经鞘细胞等。I型胶原蛋白包被细胞培养板,规格为6/24孔板,表面经I型胶原蛋白包被,可以很好的降低蛋白质的吸附。使用这种细胞培养板培养细胞,可以获得良好的细胞贴壁率,细胞增殖速度快,形态均一,细胞培养成功率高。上海鼠尾胶原厂家
使用方法:1、细胞培养器皿的表面包被:以包被浓度为2μg/cm2为例,用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干,也可以在室温放置1小时后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。2、三维胶原凝胶的制备:A、无细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/mL三维胶1mL为例)将200μL本品加到置于冰浴的离心管中,加入690μL双蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅...