2020年,JianglaiWu等人提出提高2PM横向扫描速率的装置,称为FACED(free-spaceangular-chirp-enhanceddelay)。圆柱透镜将激光束一维聚焦,会聚角为Δθ。光束进入到一对几乎平行的高反射镜中,其间距为S,偏角为α。经过反射镜多次反射后,激光脉冲被分成多个传播方向不同的子脉冲(N=Δθ/α),脉冲间以2S/c的时间延迟(c,光速)回射。FACED模块输出处的子脉冲序列可以看作从虚拟光源阵列发出的光,这些子脉冲在中继到显微镜物镜后形成了一个空间上分离且时间延迟的焦点阵列。然后将该模块并入具有高速数据采集系统的标准双光子荧光显微镜中。光源是具有1MHz重复频率的920nm的激光器,通过FACED模块可产生80个脉冲焦点,其脉冲时间间隔为2ns。这些焦点是虚拟源的图像,虚拟源越远,物镜处的光束尺寸越大,焦点越小。光束沿y轴比x轴能更好地充满物镜,从而导致x轴的横向分辨率为0.82µm,y轴的横向分辨率为0.35µm。全球多光子显微镜主要生产地区分析,包括产量、产值份额等。美国灵长类多光子显微镜成像深度
多光子激发的特点。激发波长∶两个或多个光子同时激发,激发波长是单光子激发波长的两倍或多倍(i.e.红光能激发UV探针)。多光子激发∶依赖于多个光子同时到达的时间。使用脉冲飞秒激光器(i.e.10-16 seconds),且能提供更高的峰值功率。荧光限制在焦点处,能满足多个光子同时达到产生多光子吸收。荧光强度正比于(激光强度)n。为什么使用飞秒激光器?多光子激发需要超快的激光器,皮秒脉冲不能实现三光子激发。深度成像需要更高、更窄脉冲输出功率。多光子激发光源处于近红外区,对细胞毒性和光漂白更小。美国清醒动物多光子显微镜单分子成像定位多光子显微镜的分辨率比传统的单光子共聚焦要低的多。
使用MPM对神经元进行成像时,通过随机访问扫描—即激光束在整个视场上的任意选定点上进行快速扫描—可以只扫描感兴趣的神经元,这样不仅避免扫描到任何未标记的神经纤维,还可以优化激光束的扫描时间。随机访问扫描可以通过声光偏转器(AOD)来实现,其原理是将具有一个射频信号的压电传感器粘在合适的晶体上,所产生的声波引起周期性的折射率光栅,激光束通过光栅时发生衍射。通过射频电信号调控声波的强度和频率从而可以改变衍射光的强度和方向,这样使用1个AOD就可以实现一维横向的任意点扫描,利用1对AOD,结合其他轴向扫描技术可实现3D的随机访问扫描。但是该技术对样本的运动很敏感,易出现运动伪影。目前,快速光栅扫描即在FOV中进行逐行扫描,由于利用算法可以轻松解决运动伪影而被普遍的使用。
我们要指出的是,单光子激发荧光和双光子激发荧光,是从荧光产生的机理上来区分的。而共焦则是荧光显微镜的一种结构,其目的是为了,通过共焦结构,提高整个荧光显微镜的空间分辨率。所以共焦荧光显微镜可以根据激发光源的不同,实现单光子共焦荧光成像或者双光子共焦荧光成像。往往一个普通的双光子荧光显微镜(没有共焦结构)其空间分辨率也可以达到单光子共焦荧光显微镜的水平。这样就可以简化整个系统,相对来说,就提高了激发光源的利用率,以及荧光的探测效率,这个也是我们提倡双光子荧光成像的原因之一。双光子荧光共焦显微镜由于双光子效应和共焦结构,分辨率则会更高,而我们通常说的共焦显微镜都是指单光子激发荧光的。显微镜简史:从光到多光子显微镜。
以往我们认识的光电效应是单光子光电效应,即一个电子在极短时间内能吸收到一个光子而从金属表面逸出。强激光的出现丰富了人们对于光电效应的认识,用强激光照射金属,由于其光子密度极大,一个电子在短时间吸收多个光子成为可能,从而形成多光子电效应,这已被实验证实。为什么一般讨论的光电效应都是指单光子光电效应呢?这是因为,在使用普通光源的情况下,电子吸收两个以上光子能量的概率是非常非常小的,几乎为零。事实上,爱因斯坦本人就考虑过在强光下发生光电效应的可能性问题。对此,他有如下的论述:光电效应中的一个电子吸收两个光子的几率不会大于下雨天两个雨滴同事打在一个蚂蚁上的几率。因此,多光子光电效应在实验上的研究成为可能,是二十世纪六十年代激光乃至强激光出现以后的事情。有了激光,对于双光子光电效应,在实验上和理论上均取得了许多成果。利用强激光,人们不仅观察到双光子和三光子的光电效应,甚至观察到金靶材吸收几十个等效光子实验现象。多光子激光扫描显微镜采用波长较长的红外激光,能量脉冲式激发,红外光比可见光在生物组织中的穿透力更强。bruker多光子显微镜焦点激发
多光子显微镜已经被生物学家普遍的运用于实验中。美国灵长类多光子显微镜成像深度
由于在重大工程、工业装备和质量保证、基础科研中,仪器仪表都是必不可少的基础技术和装备重点,除传统领域的需求外,新兴的智能制造、离散自动化、生命科学、新能源、海洋工程、轨道交通等领域也会产生巨大需求。中国的新型工业化进程,信息化和工业化融合的进一步加深,带动各个工业领域对于nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo等产品的需求。在国民经济运行中,生物科技,医药科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,实验室设备、仪器仪表、医疗器械、计算机、软件及辅助设备销售,计算机数据处理,货物及技术进出口业务。 成像平台: 1. Inscopix自由活动超微显微成像系统 2. DiveScope多通道内窥镜系统 3. 双光子显微镜 动物行为学平台: 1. PiezoSleep无创睡眠检测系统 2. 自身给药、条件恐惧、斯金纳、睡眠剥夺、跑步机、各类经典迷宫等 神经电生理: 1.NeuroNexus神经电极 2.多通道电生理信号采集系统 3.膜片钳系统 4.AO功能神经外科临床电生理平台 显微细胞: 1. UnipicK单细胞挑选及显微切割系统 科研/临床级3D打印 1. 德国envisionTEC 3D Bioplotter生物打印机 2. 韩国Invivo医疗级生物打印机等。等设备是提高劳动生产率的倍增器,对国民经济有着巨大的作用和影响力。美国商业部地区技术和标准研究院(NIST)提出的报告称:美国90年代仪器仪表工业产值只占工业总产值的4%,但它对国民经济(GNP)的影响面却达到66%。尽管在我国相关政策的引导和支持下,我国仪器仪表行业得到了飞速发展。但是从销售整体上看,我国的仪器仪表行业还是落后于国际水平的。重点技术缺乏、高精尖产品严重依赖进口、仪器仪表产品同质化严重、生产工艺落后、研发能力弱、精度不高等问题的凸显,为仪器仪表行业的发展带来了严峻的挑战。美国灵长类多光子显微镜成像深度