双光子显微镜基本参数
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双光子显微镜企业商机

双光子显微成像的在生物医学研究和医疗领域应用有较大的应用前景,首先双光子显微镜能够进行细胞和组织结构成像,在亚微米级成像,此功能与目前市场上的共聚焦类显微镜性能类似;双光子显微成像能够实时、在体、原位、无创地,根据不同物质组份的光谱特性,区分成像;双光子显微镜能够进行生化指标成像,在无造影剂的前提下,利用自发荧光、二次谐波、荧光获得活细胞生化信息。双光子显微镜技术在医疗诊断应用中具有巨大的潜力,该领域还未形成标准和体系,需要系统的医学研究与庞大的医疗数据加以支撑,通过研究人体基于多光子成像技术,进行细胞结构、生化成分、微环境、组织形态、代谢功能的影响信息,找到与疾病的细胞学、分子生物学、组织病理学、诊断和***特征的关联关系,共同探究生理病理基础和分子细胞生物学机制,筛选鉴定**、皮肤病、自身免疫病及其他疑难疾病的诊断及鉴别诊断依据,建立全新的多光子细胞诊断的完整数据库,定义出针对不同疾病的多光子临床检测设备的产品标准。双光子显微镜是结合了双光子激发技术和激光扫描共聚显微镜;荧光双光子显微镜厂家有哪些

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在深度组织中以较长时间对活细胞成像,双光子显微镜是当前之选。双光子和共聚焦显微镜都是通过激光激发样品中的荧光标记,使用探测器测量被激发的荧光。但是,共聚焦一般使用单模光纤耦合激光器,通过单光子激发荧光,而双光子使用飞秒激光器,通过几乎同时吸收两个长波光子激发荧光。下面是两种技术的对比图。双光子激发荧光的主要优势:双光子比共聚焦使用的更长的波长,所以对组织的损伤更小且穿透更深。共聚焦的成像深度一般为100微米,双光子则能达到250到500微米,甚至超过1毫米。另外,同时吸收两个光子意味只有较强度聚焦点处能被激发,所以不会损伤焦平面之外的组织,并且生成更清晰的图像。美国investigator双光子显微镜商家双光子显微镜使用长波长脉冲光,是通过物镜汇聚的;

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TOPTICA FemtoFiber ultra 920超快光纤激光器是一种易于操作且无需维护的激光系统。其输出波长为920 nm,非常适合常规荧光基团(如GFP,eGFP,Eosin,GCaMP,CFP,Calcein 或者Venus)的双光子激发。能给荧光基团提供比较高的峰值功率,常用于神经科学和其他与激光有关的生物光子学学科。而且其独特设计(制造简单且经济高效的光源)对双光子荧光显微镜发展的革新具有潜在的可能。在双光子显微镜中,峰值功率就是亮度!如果您希望获得比较好的图像亮度,那么你就需要短脉冲,高功率,较重要的是需要干净的时间脉冲形状。FemtoFiber ultra 920具有足够高的输出功率,较短的脉冲和独特的Clean-Pulse技术,以及具有相对比较高的峰值功率,使得其在双光子显微镜中可以实现****的亮度,而不会对样品造成不必要的加热。FemtoFiber ultra 920交钥匙,完全集成的色散补偿(可确保样品处的脉冲较短),内置的功率控制,操作直观以及其坚固而紧凑的设计,使该系统具有极为友好的用户体验,是非线性显微镜应用的较好解决方案。例如荧光蛋白的双光子激发和基于SHG的对比机制。

随着技术的发展,双光子显微镜的性能得到不断地优化,结合它的特点,大致可以分成深和活两个方面的提升。要想让激发激光进入更深的层面,大致可从两个方面入手,装置优化与标本改造。关于装置优化,我们可以把激光束变得更细,使能量更加集中,就能让激光穿透更深。关于标本,其中影响光传播的主要是物质吸收和散射,解决这个问题,我们需要对样本进行透明化处理。一种方法是运用某种物质将标本浸泡,使其中的物质(主要是脂质)被破坏或溶解。另一种方法是运用电泳将脂质电解,让标本“透明度”提高。


双光子显微镜只有焦平面处才能形成双光子吸收,而焦平面之外由于光强低无法被发动,所以双光子成像更清晰。

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Winfried Denk较初使用的光源是染料飞秒激光器(100 fs脉宽、630 nm可见光波长)。虽然染料激光器对于实验室演示尚可,但是使用很不方便所以远未实现商用。很快双光子显微镜的标配光源就变成了飞秒钛宝石激光器。除了固态光源优势,钛宝石激光器还具有较宽的近红外波长调谐范围,而近红外相比可见光穿透更深,对生物样品损伤更小。下图是Thorlabs的双光子和三光子显微镜配置,钛宝石飞秒可调谐激光器位于平台较左边。

从双光子到三光子科学家正在从双光子转向三光子显微镜。1996年,Chris Xu在康奈尔大学(Denk同导师实验室)读博期间发明了三光子显微镜,如果双光子吸收可行,那么三光子看起来也是自然的发展方向。

三光子成像使用更长的波长,大约在1.3和1.7微米,其成像深度也比双光子更深,目前记录约为2.2毫米,人类大脑皮层厚约4毫米。相比双光子显微镜,三光子还要求以较低重频使用更强和更短的激光脉冲,而传统的钛宝石激光器难以达到这些要求,但是对于掺镱光纤飞秒光参量放大器则非常容易,比如我们的Y-Fi光参量放大器(OPA)。 双光子显微镜放大倍数是多少?进口激光荧光双光子显微镜成像视野一般是多少

双光子显微镜中,同样每个时刻只有焦平面上一个点的信号被探测,并且连焦平面外的荧光信号也不会有。荧光双光子显微镜厂家有哪些

双光子显微镜为什么穿透能力强?

因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题

第1个是激发光的减弱,

第2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性,单光子激发的背景较强,所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率


因为组织对可见光区域的较强吸收和散射带来两个严重的问题

第1个是激发光的减弱,

第2个就是另外就是由于物镜本身光的光学特性,单光子激发的背景较强,所以才有共聚焦系统提高成像的分辨率

刚好双光子在这两点具有很大的优势上面的内容基本在谈到双光子优势都会相对说明,

在实际操作中成像的深度和样品的关系很大,

双光子成像利用高亮度的荧光标记材料,已经有做到mm级别的穿透深度


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