有许多方法可以实现快速光栅扫描,例如使用振镜进行快速2D扫描,以及将振镜与可调电动透镜相结合进行快速3D扫描。而可调电动式镜头由于机械惯性的限制,无法在轴向快速切换焦点,影响成像速度。现在它可以被空间光调制器(SLM)取代。远程对焦也是实现3D成像的一种手段,如图2所示。LSU模块中,扫描振镜水平扫描,ASU模块包括物镜L1和反射镜M,通过调整M的位置实现轴向扫描该技术不仅可以校正主物镜L2引入的光学像差,还可以进行快速轴向扫描。为了获得更多的神经元成像,可以通过调整显微镜的物镜设计来放大FOV。然而,大NA和大FOV的物镜通常很重,不能快速移动以进行快速轴向扫描,因此大FOV系统依赖于远程聚焦、SLM和可调电动透镜。多光子显微镜作为一种研究微观结构和功能的技术,在众多领域得到了普遍的应用。激光扫描多光子显微镜数据采集
多光子显微镜的前景巨大作为一个多学科交叉、知识密集、资金密集的高技术产业,多光子显微镜涉及医学、生物学、化学、物理学、电子学、工程学等学科,生产工艺相对复杂,进入门槛较高,是衡量一个国家制造业和高科技发展水平的重要标准之一。过去的5年,多光子显微镜市场集中,由于投产生产的成本较高,技术难度大,目前涌现的新企业不多。显微镜作为一个传统的高科技行业,其作用至今没有被其他技术颠覆,只是不断融合并发展相关技术,在医疗和其他精密检测领域发挥着更大的作用。显微镜的商业化发展已进入成熟期,主要需求来自教学、生命科学的研究及精密检测等,全球市场呈现平缓的增长态势。然而,**、、显微镜产品(如多光子显微镜、电子显微镜)正拉动市场需求,多光子显微镜市场发展潜力巨大。美国灵长类多光子显微镜供应商未来国产多光子激光扫描显微镜替代空间大。
作为一个多学科交叉、知识密集、资金密集的高技术产业,多光子显微镜涉及医学、生物学、化学、物理学、电子学、工程学等学科,生产工艺相对复杂,进入门槛较高,是衡量一个国家制造业和高科技发展水平的重要标准之一。过去的5年,多光子显微镜市场集中,由于投产生产的成本较高,技术难度大,目前涌现的新企业不多。显微镜作为一个传统的高科技行业,其作用至今没有被其他技术颠覆,只是不断融合并发展相关技术,在医疗和其他精密检测领域发挥着更大的作用。显微镜的商业化发展已进入成熟期,主要需求来自教学、生命科学的研究及精密检测等,全球市场呈现平缓的增长态势。然而,显微镜产品(如多光子显微镜、电子显微镜)正拉动市场需求,多光子显微镜市场发展潜力巨大。
多束扫描技术可以同时对神经元组织的不同位置进行成像。该技术:对于两个远程成像位置(相距1-2mm以上),通常采用两个**的路径进行成像;对于相邻区域,通常使用单个物镜的多个光束进行成像。多光束扫描技术必须特别注意激发光束之间的串扰,这可以通过事后光源分离或时空复用来解决。事后光源分离法是指分离光束以消除串扰的算法;时空复用法是指同时使用多个激发光束,每个光束的脉冲在时间上被延迟,使不同光束激发的单个荧光信号可以暂时分离。引入的光束越多,可以成像的神经元越多,但多束会导致荧光衰减时间重叠增加,从而限制了分辨信号源的能力;并且复用对电子设备的工作速度要求很高;大量的光束也需要较高的激光功率来维持单束的信噪比,这样容易导致组织损伤。全球多光子显微镜主要厂商基本情况介绍,包括公司简介、多光子显微镜产品型号、产量、产值及动态等。
多光子显微优点:☆光损伤小:由于双光子显微镜使用的是可见光或近红外光作为激发光源,这一波段的光对细胞和组织的光损伤小,适用于长时间的研究;☆穿透能力强:相对于紫外光,可见光和近红外光都具有更强的穿透能力,因而受生物组织散射的影响更小,解决对生物组织中深层物质的层析成像研究问题;☆高分辨率:由于双光子吸收截面很小,只有在焦平面很小的区域内可以激发出荧光,双光子吸收*局限于焦点处的体积约为波长3次方的范围内;☆漂白区域小:由于激发只存在于交点处,所以焦点以外的区域都不会发生光漂白现象;☆荧光收集率高:与共聚焦成像相比,双光子成像不需要光学滤波器,这样就提高了对荧光的收集率,而收集率的提高直接导致图像对比度的提高;☆图像对比度高:由于荧光波长小于入射波长,因而瑞利散射产生的背景噪声只有单光子激发时的1/16,降低了散射的干扰;☆光子跃迁具有很强的选择激发性,所以可以对生物组织中一些特殊物质进行成像研究;☆避免组织自发荧光的干扰,获得较强的样品荧光:生物组织中的自发荧光物质的激发波长一般在350~560nm范围内,采用近红外或红外波段的激光作为光源,能**降低生物组织对激发光吸收。多光子显微镜在临床前评价IA形态、细胞外基质、细胞密度和血管形成等方面显示出强大的作用。高速高分辨率多光子显微镜Ultima 2P Plus
多光子显微镜的大多数补偿器都采用棱镜。激光扫描多光子显微镜数据采集
多光子成像系统提供的优势包括了真正的三维成像、对活组织内部深处进行成像的能力以及消除平面外荧光的能力。使用这种方法进行成像,可以对斯托克斯位移非常短和/或效率非常低的荧光染料进行成像,甚至可以对样品或组织中固有的荧光分子进行成像。多光子成像的缺点包括需要高峰值功率脉冲激光器,例如锁模钛:蓝宝石激光器,并且直到现在,缺乏在整个发射范围内提供足够吞吐量的高性能滤光片。整个激光调谐范围内的兴趣和足够的阻挡。激光扫描多光子显微镜数据采集