双光子显微成像技术是近些年发展起来的结合了共聚焦激光扫描显微镜和双光子激发技术的一种新型非线性光学成像方法,采用长波激发，能对组织进行深层次成像。常用的比较好激发波长大多位于800-900nm，而水、血液和固有组织发色团对这个波段的光吸收率低，此外散射的激发光子不能激发样品，因此背景第，光损伤小，适用于在体检测。双光子荧光成像技术能准确定位细胞内置入的微电极位置，从而观察胞体、树突甚至单个树突棘的活性。研究者可完整的观察神经组织的gaofen辨荧光图像,甚至可以分辨神经细胞单个树突棘中的钙分布。钙离子也是神经元活动的重要“风向标”之一。哈尔滨细胞钙离子钙成像nVista3.0
nVista神经元超微钙成像系统是可以在自由活动的动物上进行大范围的动态荧光成像的设备。通过nVist，您可以视觉化细胞活动，同步行为学，以及长期追踪神经环路的活动。nVista被应用于全球的研究机构中，产生了影响力的大数据库。主要特征：利用GCamp钙离子探针进行成像功能完整的数据采集软件，实现对焦，调焦，行为同步化单细胞分辨率下，可同时捕获成百上千神经元活动长时间追踪细胞，追踪时间可长达数月电子对焦，保证视野范围的恒定自由动物行为学：可运用标准行为学测量方法，行为操作箱，迷宫，旷场等可进行皮层，深部核团，以及脑干，中脑等区域的成像记录动物无需进行适应性训练钙离子成像+自由活动行为学1.锚定特殊细胞类型，例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.单细胞的空间分辨率，可以分析细胞在空间内的mapping和编码信息3.动物可在大范围的旷场内自由活动4.长时程追踪同一细胞的放电规律变化：用于学习，记忆，药物成瘾等研究。5.可对脑内的深部核团进行记录nVista神经元超微钙成像系统成像效果好。神经元超微钙成像系统技术参数专业的数据采集软件Inscopix数据采集软件可记录成百上千个神经元细胞。电子调焦功能，可通过软件实现物理调焦。哈尔滨细胞钙离子钙成像nVista3.0钙成像技术在神经科学研究中的应用。
传统的宽场荧光显微镜由于光散射的影响，只能够对大脑浅层的神经元或在离体组织上进行成像，共聚焦显微镜由于光损伤较大，一般也只用于离体钙成像。随着荧光显微镜技术的迅速发展，在体钙成像技术得到了蓬勃发展。双光子荧光显微镜能够在进行在体成像的时候实现高分辨率和高信噪比。例如，用双光子显微镜对海马树突棘的钙离子信号进行成像，研究神经元突触后长时程yizhi；观察小鼠运动皮层神经元在嗅觉选择任务中刺激相关电位等等。不过，这些实验还是需要对动物进行麻醉和固定，而神经科学领域很多研究更希望能够对自由活动的动物进行研究。
单光子显微技术是相对成熟的荧光显微技术，但由于单光子显微技术使用的激发光波长较短，成像深度比较有限；能量比较大,会造成对荧光物质的漂白,光毒性严重。激光共焦扫描显微镜由于共焦显微镜的孔径很小,实现样本三维成像要逐点扫描,成像速度慢,对样本损害大,很难用于长时间活细胞成像实验。而宽场显微镜能够很好地实现实时动态成像,光漂白小,因而较早应用于活细胞内的实时检测，但宽场显微镜由于离焦信号的干扰,难以实现多维成像。对钙离子的功能研究中，钙指示剂是必不可少的工具。
细胞内钙离子作为重要的信号分子其作用具有时间性和空间性。当di1个细胞兴奋时，产生了一个电冲动，此时，细胞外的钙离子流入该细胞内，促使该细胞分泌神经递质，神经递质与相邻的下一级神经细胞膜上的蛋白分子结合，促使这一级神经细胞产生新的电冲动。以此类推，神经信号便一级一级地传递下去，从而构成复杂的信号体系，终形成学习、记忆等大脑的高级功能。在哺乳动物神经系统中，钙离子同样扮演着重要的信号分子的角色。静息状态下大部分神经元细胞内钙离子浓度约为50-100nM，而细胞兴奋时钙离子浓度能瞬间上升10-100倍，增加的钙离子对于突触囊泡胞吐释放神经递质的过程必不可少。众所周知，只有游离钙才具有生物学活性，而细胞质内钙离子浓度由钙离子的内外流平衡所决定，同时也受钙结合蛋白的影响。细胞外钙离子内流的方式有很多种，其中包括电压门控钙离子通道、离子型谷氨酰胺受体、烟碱型胆碱能受体（nAChR）和瞬时受体电位C型通道（TRPC）等。神经元钙成像的原理就是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来，以反映神经元活性。该方法可以同时观察多个功能或位置相关的脑细胞。钙成像技术被广泛应用于同时监测成百上千个神经元内钙离子的变化。哈尔滨细胞钙离子钙成像nVista3.0
钙成像技术一出现，就受到了全世界神经科学家们的追捧。哈尔滨细胞钙离子钙成像nVista3.0
CaMPARI，一种能够兼顾全局和微观的新型钙成像技术，包含CaMPARI以及CaMPARI2（第二代）。其原理在于，CaMPARI蛋白在正常状态下会发出绿色荧光，而如果对这种蛋白同时使用高浓度钙离子与紫外光处理，它就会不可逆、长久地转变成另一种能发出红色荧光的构象，即实现将瞬间的神经元活动变成长久的红色荧光蛋白表达。研究人员通过转基因技术将这种新型蛋白导入到实验动物的神经系统中，然后用度的紫外光照射动物的大脑，通过检查荧光，找到发红色荧光的神经元，这些神经元即是在紫外光照射期间活跃的神经元。由于紫外光可以对着整个大脑进行照射，所以理论上，人们可以对全脑进行检查。哈尔滨细胞钙离子钙成像nVista3.0
