香港山羊精子分析ALH

CASA系统进行**分析应注意以下几点：

3.2**分析仪阈值的确定（1）精子灰度、对比度阈值：由于分析仪是根据灰度的高低来判断精子的真伪，对亮度和对比度要求特别高，检测时应多次试用，寻找能准确识别精子的比较好灰度阈值[8]。（2）碎片：测定精子浓度准确性受**中细胞成份和非精子的颗粒物质的干扰，测定活动精子的百分率也受精子中非精子物质的影响[9]，这些也是需要注意的。对于系统误认为精子的非精子成分，如精原细胞、白细胞和非白细胞颗粒等，可人为准确记数后在可删除杂质一栏将其舍去。3.3出现1次异常结果应间隔复查反复检查2�3次方能得出比较正确的结果。3.4对于无精子的患者应仔细进行视野检查注意不要将杂质误认为精子计数在内，应将**3000ɡ离心15分钟后，再涂片检查，确认无精后再出报告。 Hamilton Thorne精子分析仪是一款功能强大、准确可靠的精子质量评估设备。香港山羊精子分析ALH

精子手工计数原理及操作方法

1.原理：将精液用适当的稀释液作一定量稀释后，混匀注入计数池内计数，再算出每毫升精液中精子数。2.方法（按照***版第四版《全国临床检验操作规程》）1).于小试管内加精子稀释液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀释液内混匀。2).充分摇匀后,滴入改良Neubauer计数板的计数池内,静置1~2分钟,待精子下沉后,以精子头部作为基准进行计数。

3.计算1).如每个**中方格内精子少于10个,应计数所有25个中方格内的精子数。2).如每个**中方格内精子在10~40个,应计10个中方格内的精子数。3).如每个**中方格内精子多于40个,应计数5个中方格内的精子数。公式：精子数=计数结果/计数中方格×25×1/计数池高度×20×103/ml=计数结果/计数中方格×1/计数池高度×5×103/ml 北京水生动物精子分析VSLHamilton Thorne精子分析仪具有高度的可靠性和稳定性，能够长时间稳定运行，保证数据的准确性和可重复性。

CASA可将每个精子的活力按以下分级：（1）前向运动型（PR）：精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动。（2）非前向运动型（NP）：所有其他非前向运动的形式，如精子在较小的范围内运动，精子头部轻微移位或只观察到尾部摆动。（3）完全不动型（IM）：精子完全不动。CASA系统检测的这些参数有一套标准的术语。（1）VCL=曲线速度（mm/s）。精子头沿其实际的曲线，即在显微镜下见到的二维方式运动轨迹的平均速度。检测细胞活力。（2）VSL=直线速度（mm/s）。根据精子头在开始检测时的位置与***所处位置之间的直线运动的时间平均速度。（3）VAP=平均路径速度（mm/s）。精子头沿其空间平均轨迹移动的时间平均速度。（4）ALH=精子头侧摆幅度（mm）。精子头沿其空间平均轨迹侧摆的幅度。以侧摆的最大值或平均数值表示。（5）LIN=直线性。曲线轨迹的直线性。即VSL/VCL。（6）WOB=摆动性。精子头沿其实际轨迹的空间平均路径摆动的尺度。即VAP/VCL。（7）STR=前向性。空间平均路径的直线性。即VSL/VAP。（8）BCF=鞭打频率（Hz）。精子曲线轨迹越过其平均路径轨迹的时间平均速率。（9）MAD=平均移动角度（度）。精子头沿其曲线轨迹瞬间转折角度的时间平均***值。

美国Hamilton Thorne的TOX IVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5 min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOX IVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。‌精子分析可以分析参数有，曲线速率（VCL）‌：精子头沿其实际曲线运动的时均速率。

CASA精子运动速度和运动轨迹特征主要参数有：①轨迹速度（VCL）：也称曲线速度，即精子头部沿其实际行走曲线的运动速度。②平均路径速度（VAP）：精子头沿其空间平均轨迹的运动速度，这种平均轨迹是计算机将精子运动的实际轨迹平均后计算出来的，可因不同型号的仪器而有所改变。③直线运动速度（VSL）：也称前向运动速度，即精子头部直线移动距离的速度。④直线性（LIN）：也称线性度，为精子运动曲线的直线分离度，即VSL/VCL。⑤精子侧摆幅度（ALH）：精子头实际运动轨迹对平均路径的侧摆幅度，可以是平均值，也可以是最大值。不同型号的CASA系统由于计算方法不一致，因此相互之间不可直接比较。⑥前向性（STR）：也称直线性，计算公式为VSL/VAP，亦即精子运动平均路径的直线分离度。⑦摆动性（WOB）：精子头沿其实际运动轨迹的空间平均路径摆动的尺度，计算公式为VAP/VCL。⑧鞭打频率（BCF）：也称摆动频率，即精子头部跨越其平均路径的频率。⑨平均移动角度（MAD）：精子头部沿其运动轨迹瞬间转折角度的时间平均值。⑩运动精子密度：每毫升精液中VAP>0μm/s的精子数。CASA系统主要用于精子动力学的分析，可以评估精子的浓度、活力等参数。香港水生动物精子分析精确温度控制

在精子研发的历程中，计算机辅助精子检测经历了黑白图像机、彩色图像检测。目前先进的是荧光精子图像检测。香港山羊精子分析ALH

精子分析仪使用注意事项

1.样品制备是CASA取得高质量检查结果的关键。CASA采用深度为10um样品池，能保证精子在单层界面内自由运动。取样分析前标本必须充分混匀，用微量取液器取5~7ul**加入样品池中，用0.5mm厚皿盖片盖紧。

2.不洁净的计数池可影响精子的活力，尤其影响灰度CASA精子计数的准确性。

3.精子样品密度过大时，造成图像处理上的粘连，无法分析每个精子的运动特性。**中所含精子太少时，需增加检查视野数量或者使用低倍物镜观察，以提高样品检出率。 香港山羊精子分析ALH