一项由葡萄牙尚帕莫未知中心,牛津大学,哥伦比亚大学,荷兰鹿特丹伊拉斯谟大学,麻省理工学院,伦敦大学,德国MaxPlanck生物控制论研究所,德国图欧宾根大学多方合作的研究于2020年11月4日在Neuron上发表了题为TheAnteriorCingulateCortexPredictsFutureStatestoMediateModel-BasedActionSelection的文章,作者通过一个新的两步谜题任务了解基于模型的决策使用对行为具体后果的预测,在小鼠的一系列决策任务中使用Inscopix显微钙成像和光遗传学来证明前扣带皮层(ACC)预测了行动将导致的状态,而不仅*是预测它们是好是坏,并判断结果是否与这些预测相符。研究结果表明,ACC是基于模型的控制的关键节点,在预测所选操作的未来状态方面发挥着特定作用。双光子荧光显微镜的发展,使在实验动物处于活动状态下的钙成像技术取得了飞速进展。美国在体钙成像nVista
钙成像的荧光指示剂钙成像的荧光探针一般均为Ca2螯合剂EGTA,APTRA,BAPTA的衍生物,它们可以结合钙离子从而显示一个光谱响应,使研究者可以用荧光显微镜来观察细胞内的自由钙的浓度。荧光显微镜可以使用普通的倒置荧光显微镜来进行钙信号的测定和成像。并可结合电生理设备、活细胞培养装置等,适用于大强度、广范围的钙信号测定。共聚焦显微系统,共聚焦以激光为光源,且可配备氩离子光源,可以选择可见光激发的钙指示剂,进行层扫,相比普通荧光显微镜有更好的空间分辨率。并且共聚焦除了配备大视野扫描镜更可配置共振扫描振镜,以满足更高速成像应用的需求。双光子显微系统使用长波长来激发荧光指示剂,具有较低的细胞毒性,也可适用于紫外激发的钙指示剂,且可获得和单光子共聚焦系统类似的空间分辨率。小结综上可见,在研究钙信号时,可结合样品自身特点来选择相应的钙指示剂,并考虑既有的实验设备,来确定具体的实验方案。同时还需进一步摸索实验数据的校正、控制等多种影响因素,可获得可靠的图像及荧光定量数据。宁波荧光钙成像nVista3.0随着荧光显微镜技术的迅速发展,在体钙成像技术得到了蓬勃发展。
解决钙成像装置对核磁成像的干扰:考虑到金属对核磁成像的影响,研究人员在核磁共振成像的模块上装上了钙成像模块,该成像模块所有的金属元件全部被更换为非导电塑料。考虑到磁场对光纤记录系统的干扰,减少钙信号的噪音,将相干光纤激光器与核磁共振放置相邻不同的房间。解决钙成像和核磁成像区域的一致性:在成像过程中,以皮层区域的血管分布为参照物,以保证钙成像和核磁成像的区域基本保持一致。但在实际成像中,钙离子变化和血氧水平依赖性信号所响应的区域并不是完全重合。因此研究人员将响应区域内的信号变化幅度进行均一化,尽量避免因统计阈值引起差异。
多种钙离子指示剂和钙成像手段的存在使研究人员能够根据具体的实验需要进行选择。同样,选择合适的检测设备也是至关重要的。对于使用CCD/sCMOS相机的成像系统来说,有两个要求是很基本的:采集速度:根据不同的应用所需的相机帧速也不同,对于神经细胞来说,一般要求相机速度至少在10fps以上,有些高速应用场景可能需要几百甚至上千Hz的帧速。灵敏度:为了尽可能降低光漂白和其他副作用(特别是蓝光激发时),需要降低激发光强度。因此相机要在较宽的发射光波长范围上具有高灵敏度,才能检测到弱光条件下的信号,并适应不同的染料的光谱发射特性。钙信号发挥着高度特异性的功能。
钙离子成像技术(Calciumimaging)是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法,常用于神经系统的研究,指示神经元内钙离子的变化,提示神经元活动。其原理在于借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系,利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针(钙离子指示剂,<spanlang=EN-US>Calciumindicator),将神经元中钙离子的浓度通过荧光强度表现出来,并被显微镜捕捉,从而达到监测神经元活动的目的。钙离子在神经元功能中起着重要的作用:它们作为细胞内的信号可触发响应,如改变基因表达和突触囊泡中神经递质的释放。由于细胞内有离子泵在各种信号刺激下选择性地运输这些离子,胞内钙浓度是高度动态的。钙成像利用钙离子流的优势,在活神经细胞上直接可视化钙信号。对钙离子的功能研究中,钙指示剂是必不可少的工具。浙江荧光显微钙成像联系方式
长时间追踪相同细胞,进行可重复的科学研究对自由行为动物进行慢性钙成像研究。美国在体钙成像nVista
钙成像技术在许多领域都有广泛的应用,以下是一些常见的应用场景:1.神经科学研究:钙成像技术被广泛应用于研究神经元活动和神经网络的功能。可以观察神经元的钙离子动态变化,揭示神经元的兴奋性和抑制性活动,研究神经网络的连接和信息传递。2.细胞信号传导研究:钙离子在细胞内起着重要的信号传导作用。钙成像技术可以用于研究细胞内钙离子的浓度变化,揭示细胞信号传导的机制和调控过程。3.细胞凋亡研究:钙离子在细胞凋亡过程中扮演重要角色。钙成像技术可以用于观察细胞内钙离子的变化,研究细胞凋亡的启动和执行过程。4.药理学研究:钙成像技术可以用于评估药物对细胞内钙离子浓度的影响。可以研究药物的作用机制、药物的剂量效应关系等。5.疾病研究:钙成像技术可以应用于研究与钙离子信号传导相关的疾病,如神经退行性疾病、心血管疾病等。可以揭示疾病发生及发展的机制,为疾病的诊断和诊疗提供依据。总之,钙成像技术在神经科学、细胞生物学、药理学和疾病研究等领域都有广泛的应用,可以帮助揭示生物过程的机制和疾病的发生及发展过程。美国在体钙成像nVista