首先我们来简单介绍一下激光扫描共聚焦和双光子这两种当红的显微成像技术。激光扫描共聚焦显微技术,是荧光显微成像的一种,用于激发样品的荧光信号并对其放大成像。在激光扫描共聚焦显微镜中,样品焦平面上每一时刻只有一个点被激发光照射,纵然焦平面外也有激发光照射,但通过探测器前的(pinhole),有焦平面上的荧光信号能被探测器接收。也就是说,每个时刻,只有焦平面上一个点的信号被探测。通过点扫描的方式,一个个点的信号就可以组合出终的图像。双光子显微镜(包括多光子显微镜)同样采用点扫描的方式得到图像。不同的是,其采用的激发光波长较长,只有当两个(或更多)激发光光子几乎同时轰击荧光探针的时候才可能激发出荧光信号。所以只有在光子密度特别大的焦点,出才会激发出荧光。也就是说,双光子显微镜中,同样每个时刻只有焦平面上一个点的信号被探测,并且连焦平面外的荧光信号也不会有。双光子显微镜使用的是高能量锁模脉冲器。国外布鲁克双光子显微镜供应商
从双光子的原理和特点我们就可以明显的得出双光子的优点:☆光损伤小:由于双光子显微镜使用的是可见光或近红外光作为激发光源,这一波段的光对细胞和组织的光损伤小,适用于长时间的研究;☆穿透能力强:相对于紫外光,可见光和近红外光都具有更强的穿透能力,因而受生物组织散射的影响更小,解决对生物组织中深层物质的层析成像研究问题;☆高分辨率:由于双光子吸收截面很小,只有在焦平面很小的区域内可以激发出荧光,双光子吸收只局限于焦点处的体积约为波长3次方的范围内;☆漂白区域小:由于激发只存在于交点处,所以焦点以外的区域都不会发生光漂白现象;☆荧光收集率高:与共聚焦成像相比,双光子成像不需要光学滤波器(共焦),这样就提高了对荧光的收集率,而收集率的提高直接导致图像对比度的提高;☆图像对比度高:由于荧光波长小于入射波长,因而瑞利散射产生的背景噪声只有单光子激发时的1/16,明显降低了散射的干扰;☆光子跃迁具有很强的选择激发性,所以可以对生物组织中一些特殊物质进行成像研究;国外激光荧光双光子显微镜原理双光子显微镜的应用中,该如何选择以及更好的使用PMT。
N掺杂可以明显影响碳点(CDs)的发射和激发特性,使双光子碳点(TP-CDs)具有本征双光子激发特性和605 nm的红光发射特性。在638 nm激光照射下,除了长波激发和发射外,还可以实现活性氧(ROS)的产生,这为光动力技术提供了巨大的可能性。更重要的是,通过各种表征和理论模拟证实,掺杂诱导的N杂环在TP-CDs与RNA的亲和力中起关键作用。这种亲和力不仅为实现核仁特异性自我靶向提供了可能,而且通过ROS断裂RNA链解离TP-CDs@RNA复合物,赋予治疗过程中的荧光变异。TP-CDs结合了ROS的产生能力、光动力疗法(PDT)过程中的荧光变化、长波激发和发射特性以及核仁的特异性自靶向性,可以认为是一种结合核仁动态变化实时处理的智能CDs。
高光子密度带来的高能量容易损伤细胞,所以双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脉冲达到最大值所持续的周期只有十万亿分之一秒,而其频率可以达到80至100兆赫,这样即能达到双光子激发的高光子密度要求,又能不损伤细胞,使扫描能更好地进行。双光子显微镜在各领域研究中已有许多成功实例生物领域:贝尔实验室的Svoboda等人研究了大脑皮层神经元细胞内钙离子动力学情形。利用双光子显微镜观察到的现象证明了钙离子的增加依赖于肌体触发的钠离子作用电势。信息领域:美国科学家Rentzepis提出了一种在现有二维光盘的基础上将数据储存扩展到三维空间。由于双光子激发具有作用精细体积小的特点,避免了层与层之间的互相干扰,极大地提高了数据储存密度。双光子显微镜的性能得到不断地优化,结合它的特点,大致可以分成深和活两个方面的提升。
双光子显微镜的基本原理是:在高光子密度的情况下,荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子,在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后,发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度,为了不损伤细胞,双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,其脉冲宽度只有 100 飞秒,而其周期可以达到 80至100兆赫兹。在使用高数值孔径的物镜将脉冲激光的光子聚焦时,物镜的焦点处的光子密度是比较高的,双光子激发只发生在物镜的焦点上,所以双光子显微镜不需要共聚焦,提高了荧光检测效率。双光子显微镜能够进行光裂解、光转染和光损伤等光学操纵。国外布鲁克双光子显微镜供应商
双光子显微镜成像技术及不同转基因小鼠开展对多种脏器的成像研究。国外布鲁克双光子显微镜供应商
公司技术团队由一群仪器仪表领域内具有丰富的经验的工程师组成。业务范围覆盖至nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo等。nVista,nVoke,3D bioplotte,invivo可分为通用型和专业型,通用型仪表主要包括工业自动控制系统装置制造、电工仪器仪表、绘图、计算及测量仪器、实验分析仪器、试验机制造、供应用仪器仪表、其他通用仪器;我国仪器仪表行业发展速度较快,但高阶产品供给能力依然欠缺,随时面临被断供的风险。系列政策出台,助力本土企业突围。经济的快速发展推动了我国仪器仪表市场的持续增长,很多第三方检测机构都面临着实验室扩增、新建实验室和老旧仪器淘汰问题。通过灵活应对现金流的问题,做到平衡资金和发展以取得更高的企业竞争优势。国外布鲁克双光子显微镜供应商
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