HE染色法,石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。去氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中称蓝色,所以细胞核被染成蓝色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明对比。伊红是细胞浆的良好染料。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后,细胞核及钙盐粘液等呈蓝色,可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝,如处理适宜,可使细胞核着清楚的深蓝色,胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆,使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。HE染色小攻略技巧分析。贵州专业的HE染色服务
HE染色全名苏木精—伊红染色法,属于化学染色法,其主要依靠苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。实验过程:1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。2、苏木素染色:切片入苏木素染液染3-5min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。3、伊红染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脱水各5min,入伊红染液中染色5min。4、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I5min-无水乙醇II5min-无水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。5、显微镜镜检,图像采集分析。结果判读:细胞核呈蓝色,细胞质呈红色宁夏性价比高的HE染色报告专业的HE染色服务平台,南京英瀚斯生物。
HE染色观察肝脏HE染色切片,首先要在显微镜下找到肝脏的标志性结构——肝小叶。显微镜首先调4倍物镜,调准焦螺旋至视野清晰,可以看到肝小叶结构。人的肝小叶之间结缔组织少,小叶分隔不明显,但动物如猪或小鼠,其肝小叶分界非常明显。肝小叶**有**静脉,在横切片上显示为空洞。肝小叶之间为将物镜调制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小叶结构。肝细胞以**静脉为中心向周围放射状排列,称为肝板。一般在20倍物镜下可以清晰看到肝细胞。20倍物镜下,肝细胞内染色为蓝色的是细胞核,细胞核大而圆,居中,异染色质少而着色浅,能清晰看到核仁。肝细胞胞质丰富,多成嗜酸性,当蛋白质合成旺盛时,胞质内出现散在的嗜碱性物质。肝细胞内有丰富的细胞器比如溶酶体、高尔基体、内质网,等等,但是在光镜下是无法看到的,需要在电镜下才能观察到。当然,肝小叶内除了肝细胞,还有胆小管、肝血窦、肝巨噬细胞等组织形态,但是在HE染色时并不容易观察到。做肝脏HE染色切片主要目的一般都是为了观察肝细胞形态是否完整、胞核有无增大、肝小叶形态是否完整,以检测药物等刺激因素对肝脏的损伤作用。
HE染色常见问题:成片的染色模糊不清,灰染答:(1)组织未及时固定,部分自溶;或固定不佳,深部组织未处理到。这种只能重新固定了。(2)尽管乙醇也是一种固定液,但尽量少用或不用,因为其会导致组织发硬变脆,染色效果不好。(3)包埋时蜡的温度过高,或切片后烤片时间和温度过久过高都不好,可能会导致无法染色。(4)脱蜡不彻底;染料有问题;分化过度导致的颜色变淡,镜下组织界限不清;染完后的脱水和透明不佳,水雾残留在组织上。(5)通风窗中(防止空气中的水雾),戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)。肺部组织HE染色如何观察。
HE染色组织样本水化:将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min,使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去,使水可以进入组织中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以达到充分水化的效果。组织切片苏木素染色、分化与反蓝:将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,总共清洗3次。之后用移液***吸取已经预先配制好的苏木素染色液,每个组织切片滴加100ul,充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化,使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木素染蓝色,使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中,让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。HE染色结果如何分析和读片?江西靠谱的HE染色多少钱
HE染色原理 试剂 染色步骤 注意事项 。贵州专业的HE染色服务
HE染色分化作用:染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木精的醌型结构,使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后,必须用0.5%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去,在进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此,在HE染色中分化是极为关键的一步。返蓝作用:分化之后,苏木精在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色,在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色,故分化之后,立即用水出去组织切片上的酸而终止分化,再用弱碱性水(0.2%氨水)使苏木精染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。贵州专业的HE染色服务
南京英瀚斯生物科技有限公司是一家服务型类企业,积极探索行业发展,努力实现产品创新。英瀚斯生物是一家有限责任公司(自然)企业,一直“以人为本,服务于社会”的经营理念;“诚守信誉,持续发展”的质量方针。公司业务涵盖实验外包,动物模型构建,细胞分子实验,病理检测,价格合理,品质有保证,深受广大客户的欢迎。英瀚斯生物以创造***产品及服务的理念,打造高指标的服务,引导行业的发展。