免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断,进而影响病理诊断,所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要,它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调,密切配合和共同努力,病理医生选择抗体,设置对照,判读结果,指导技术;而技术人员进行实验操作,保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节,每一环节的失误都可能影响检测结果,如抗原保存,蛋白酶消化,增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等,因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。病理报告中的免疫组化到底有什么作用?吉林组织免疫组化怎么选择
关于免疫组化的封闭:用和二抗来源一致的血清在保湿盒中于37℃孵育15~30min,然后甩去封闭用血清,勿洗;注意:封闭时间根据具体实验调整;封闭液一般选用5%BSA或与二抗来源一致的血清,切记是BSA,不是PBS.很多论坛写的是PBS,太坑了。①使用血清好还是BSA好?答:***是待检样本会非特异性的和蛋白结合,从而导致背景过高,因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合,从这点看,BSA和血清没有明显区别。第二是待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,与抗体特异性无关,封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。贵州组织免疫组化关于免疫组化的常见问题汇总。
免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么?
(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。
(2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。
(3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错。
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免疫组化有哪几种分类 ?
1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。
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3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 免疫组化技术的原理、分类和优点!
病理医师日常工作中经常说的一句话应该就是“做个免疫组化吧”;不管是临床医师,还是患者,他们问的多的问题则是“为什么要做免疫组化?”病理医师通过“特殊染色”来进行细胞的识别。这一做法的依据是特定细胞和组织中的成分不同、则化学性质不同,通过染色的方法则可以呈现不同颜色。不过,由于组织固定或储存等,会造成相应物质的活性降低甚至消失,因而限制了特殊染色方法的应用。随着免疫学研究的进展,根据抗原与相应抗体间特异性结合的性质,则有了现在免疫组化的方法:不同细胞、不同组织中抗原有一定差异,抗体与被测组织中的特定抗原结合,进而通过一定显色方法将结合的抗体显示出来。如有相应显色,则证实可能有被测抗原;无显色则可能无被测抗原。当然,这一方法中需注意相应的“例外”,如抗体的非特异性结合、非特异性显色,则容易造成“假阳性”;或者虽有相关抗原、但所用抗体与该抗原并未结合等,则容易造成“假阴性”。随着免疫组化的应用经验的增加,这些问题在常规应用中尽量得以避免,前者如各种显色方法的优化;后者如抗原修复方法的优化、新型抗体开发及选择。临床样本检测,免疫组化,英瀚斯生物专业病理。安徽动物组织免疫组化价格
免疫组化的样本保存要求是什么?吉林组织免疫组化怎么选择
免疫组化中免疫胶体金技术,英瀚斯生物小编为您说明介绍。免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。吉林组织免疫组化怎么选择
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