前面已经说灭活病毒保存液可以使病毒失去活性,失去活性后是怎么来进行检测的呢?我们使用灭活型保存液的目的是裂解核酸,释放核酸然后通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,通过这种方法来判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否了病毒。而病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测出了病毒。通常我们在病毒采样后,样本并不是都能在样本采集处进行运输和保存的,因此我们就需要对采集到的病毒拭子进行运输和保留,不然病毒核酸会很快降解就无法检测到核酸了,所以就需要往采样管里加保存液来让病毒的核酸不要那么快被降解。病毒存在不易保存和易的弊端,但灭活型病毒保存液完美解决了这一弊端。江门细胞保存液品牌企业
灭活型病毒保存液里含有裂解盐等成分,主要目的是裂解核酸并释放出核酸,从而通过后续的实时荧光RT-PCR进行核酸检测,以判断样本是否含有病毒特征核酸,即是否病毒。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两类,是生命的基本物质之一。病毒结构单一,就只含有一种核酸和蛋白质,因此检测出特征核酸就检测出病毒。病毒属于寄生生物,采样后体外无法存活,如果不能及时检测,就需要放入病毒保存液中。为了保护病毒检测环境的安全性,就需要加入裂解盐来灭活病毒,释放出可以被检测的核酸即可。 北京支原体保存液生产厂家通常在数分钟内,病毒的衣壳蛋白就会发生变性,使病毒失去能力。
另一种以核酸提取裂解液为基础配制的保存液,主要成分为平衡盐类、EDTA螯合剂、胍盐(如异硫氰酸胍、盐酸胍等)、阴离子表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)、阳离子表面活性剂(如十四烷基三甲基草酸铵)、苯酚、8-羟基喹啉、二硫苏糖醇(DTT)、蛋白酶K等几种或多种组分,这种保存液是直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase),如果用于RT-PCR较为合适,但裂解液可以灭活病毒,这种样本不能用于病毒的培养分离。
病毒保存液使用的金属离子螯合剂推荐使用EDTA盐类(如乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠等),不推荐使用肝素类(如肝素钠、肝素锂),以免影响PCR检测。
目前市面上的一次性使用病毒采样管通常分为两种,一种是非灭活的,能够保护病毒的蛋白和核酸的,另一种是灭活型的,通常含有灭活病毒的裂解盐,裂解蛋白而保护核酸。下面我们一起来聊聊这两种病毒采样管都有什么不一样的地方?
非灭活型病毒采样管保存的病毒完整性更好,检出率会更高,除了核酸检测外还可以用于其他研究。灭活型病毒保存液则使用上更安全,操作环境要求也不用那么严格,各有各的优势。
非灭活病毒采样管可以低温非冻型保存,也不会破坏病毒的外壳,方便长途运输;也适用于各种拭子采样样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽拭子等;可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用于拭子采样的病毒,非灭活保存液中的能够有效地防止细菌和,保存液中添加了牛血清白蛋白,能够保护病毒样本,提离率。
非灭活型的主要优点是检出率高,缺点是具有一定的危险性。
作为核酸检测的第一步,样本采集与保存的重要性毋庸置疑,有很长一段时间里市场上的病毒保存液几乎都是直接保存活病毒,其实也就是非灭活型的病毒保存液,导致采样、运输和检测中的医护人员均面临较高的风险,针对这种情况,抗疫非常需要能直接灭活病毒的样本保存液,这样可以提高样本采集、运输过程中的安全性。
高度负责任的病毒保存液厂家不仅能够兑现许下的承诺,还能确保在不夸大的前提下描述事实,例如对于原材料的筛选严格到位,杜绝弄虚作假。而不大负责的厂家只会为了促单而大加渲染,在此过程中,客户应擦亮双眼、明辨是非。 而病毒本身在体外很快就会裂解掉影响后续检测,所以在保存和运输时,就需要加入病毒保存液。深圳病毒保存液
灭活型病毒保存液的主要优点是方便,快速,安全,缺点是检出率偏低;江门细胞保存液品牌企业
采样前,在标签上注明样品信息;
根据不同的实验目的,用采样拭子在相应的部位采样;
采样后迅速将拭子放入含病毒运送培养基采样管中,在折断点处将其折断,旋紧管盖;
使用灭活款采样管新鲜采集的标本,可在常温(5-25°C)条件下,7天内运送至实验室,运输时有冰袋的效果会更好。用于核酸检测的标本,24小时内检测效果更好。
具体采样方法如下:
(1)鼻拭子:将拭子头轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以另一拭子拭另侧鼻孔,将拭子头浸入采样液中,在折断点处将其折断,弃之。(适合用本产品采样)
(2)咽拭子:用拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,同样将拭子头浸入采样液中,弃之。(适合用本产品采样)。 江门细胞保存液品牌企业
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