在桥式扩增过程中，通过PCR反应扩增每个DNA片段，形成大量的克隆。这些克隆在芯片上形成了密集的桥式结构，使得每个DNA片段都能够被地扩增和测序。在同步测序过程中，使用荧光标记的核苷酸依次进行链延伸。每次加入一个核苷酸，都会释放出特定波长的荧光信号。通过检测不同荧光信号的强度，可以确定每个DNA片段上的碱基序列。Illumina 测序技术是一种非常强大的高通量测序技术，它为基因组学研究、疾病诊断和药物开发等领域提供了重要的技术支持。随着技术的不断发展，Illumina 测序技术的性能和应用领域还将不断拓展和完善。链特异性转录组具备独特的能力，可以明确地确定转录本是来自正义还是反义 DNA 链。单细胞空间转录组测序
真核有参转录组测序（RNA-seq）是一种在有参考基因组的物种中进行的高通量转录组测序技术，通过二代测序平台，可以快速地获得动植物特定细胞或组织的转录本及基因表达信息。这种技术在生物学研究中扮演着重要的角色，可以用于研究基因表达水平、基因功能、可变剪切、SNP以及新转录本的发现等方面。RNA-seq技术是一种利用高通量测序技术对RNA样本进行测序的方法，可以获得特定组织或细胞中的所有转录本的信息，包括mRNA、小RNA、rRNA和lncRNA等。单细胞空间转录组测序相信真核无参转录组测序技术将推动整个生物学领域的发展。
在真核有参转录组测序中，基因表达的差异分析主要有以下几种方法：倍数变化法（FoldChange）;统计学检验方法;基于模型的方法；非参数检验方法；贝叶斯方法；聚类分析；基因集分析;差异表达分析软件;例如，在研究某种疾病与正常组织的基因表达差异时，可以使用 t 检验来比较两组样本中各个基因的表达量，筛选出差异的基因；或者利用基因集分析来查看与疾病相关的通路中基因的整体表达变化情况。这些方法的综合运用可以更、准确地揭示基因表达的差异及其背后的生物学意义。
通过DGE分析，我们可以确定在疾病状态、不同发育阶段或不同环境下，哪些基因表达发生了变化，进而帮助我们了解引起这些变化的生物学过程。DGE分析的意义不仅在于发现差异表达的基因，更重要的是发现这些差异的生物学意义。差异基因可能涉及到一系列的生物学过程，例如细胞信号传导、代谢途径、细胞增殖和凋亡等。因此，通过对差异基因的生物学功能进行进一步探究，可以帮助我们理解不同条件下基因表达调控的机制，从而为疾病诊断、药物开发等领域提供重要依据。真核无参转录组测序技术适用于目标生物的基因组序列并不完全已知或不具参考基因组。
通过长读长RNA测序，研究人员可以更好地研究复杂的基因组区域、检测稀有的转录变体和识别基因的融合事件，从而为生命科学研究提供更加和准确的数据。一项重要的应用是在基因结构研究方面。传统的短读测序技术可能无法准确识别基因的外显子和内含子，尤其是在存在复杂的剪切变异或转录本中。长读长RNA测序技术的出现填补了这一空白，能够提供更完整的基因结构信息，帮助科研人员更准确地理解基因的功能和调控机制。通过长读长RNA测序，可以发现新的外显子和内含子，揭示不同剪切图谱的变异和新型转录本，为基因组学和基因调控研究提供更多可能性。在特定组织或细胞的研究中，真核无参转录组能够呈现出该组织或细胞特有的基因表达模式。单细胞空间转录组测序
真核无参转录组测序的具体步骤可能因实验目的、样本类型和研究需求而有所不同。单细胞空间转录组测序
通过二代测序平台，快速获得动植物特定细胞或组织的转录本及基因表达信息，可进行基因表达水平、基因功能、可变剪切、SNP以及新转录本发现等方面的研究。与传统的芯片检测技术相比，RNA-seq技术具有更高的灵敏度和动态范围，可以检测到低表达基因并能够识别出多个同一基因的不同剪切形式。在RNA-seq实验中，首先需要从样品中提取RNA并进行建库，然后将建库后的RNA样本通过测序仪进行高通量测序，得到原始测序数据。接下来，利用生物信息学分析软件对原始测序数据进行质控、比对、拼接和定量分析，终获得基因表达水平、可变剪切、SNP等信息。单细胞空间转录组测序
