免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色?
(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。
(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;
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(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;
(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;
(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;
(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。 关于免疫组化的常见问题汇总。新疆靠谱免疫组化是什么
细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封闭20min(封闭电荷)。
5、去除BSA液,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜。
6、PBS洗3次,每次5min。
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7、去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。
8、PBS洗3次,每次5min。
9、去除PBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色。
10、显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化(1s),自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精(70-100%)10min一个梯度,脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固。 内蒙古小鼠免疫组化哪家好英瀚斯生物,组织包埋、切片、染色、免疫组化拍照、报告分析,一站式搞定!
在临床应用中,免疫组化还可以进一步分类不同qi官与组织交界处cancer。由于重叠的特征,在一些组织qi官交界处的cancer,只凭组织学基础对cancer进行分类很困难。如胃肠道梭形细胞肉瘤是肌肉起源的平滑肌肉瘤,是间质起源的胃肠道间质瘤(GIST),还是神经起源的神经鞘瘤;同样发生于组织交界处的cancer有睾丸胚胎cancer与精原细胞cancer,两者较难区别,且医疗与预后明显的不同,但用免疫组化检测角蛋白就较易于区别:角蛋白阴性则为精原细胞cancer,而角蛋白阳性则为胚胎cancer。
关于免疫组化,抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有设计免疫组化的实验哦!如果您对此有希望了解更多,可以与我们联系!有没有能做免疫组化的实验外包公司?效果好一点的。
免疫组化染色切片的好坏直接影响着病理医生对其染色结果的判断,进而影响病理诊断,所以制作一张良好的免疫组化切片至关重要,它需要病理医生与病理技师两者间的相互协调,密切配合和共同努力,病理医生选择抗体,设置对照,判读结果,指导技术;而技术人员进行实验操作,保证染色质量。在免疫组化切片的制作过程存在多个环节,每一环节的失误都可能影响检测结果,如抗原保存,蛋白酶消化,增强技术及对抗体的管理、使用和试剂的浓度等等,因此制作一张高质量的免疫组织化学切片是多方面相互配合的结果。免疫组化protocol,详情请看英瀚斯生物官网。湖北细胞免疫组化是什么
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免疫组化的DAB显色时间如何把握?
1、DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现浅棕色本底时即可冲洗;
2、DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间;
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3、此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间;
4、DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现阳性染色,一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短(比较好一抗4度过夜);另一方面就是封闭时间过长。 新疆靠谱免疫组化是什么