细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:
1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
支原体及污染方式有哪些?深圳细胞培养支原体检测试剂
细胞培养中,支原体检测的重要性体现在以下几个方面:
1. 高污染发生率:支原体对培养细胞的污染发生率非常高,据估计平均发生率在60%左右。
3. 隐匿性强:支原体污染具有很高的隐匿性,早期不容易被发现,除非使用特异性和灵敏度都非常高的专业检测试剂盒。
3. 影响实验结果:支原体污染会改变细胞的生理性质,影响实验结果的准确性。细胞培养物一旦被支原体污染,会改变细胞DNA、RNA及蛋白表达,导致实验数据不准确、不稳定。
4. 难以通过肉眼或常规方法发现:支原体污染无法通过肉眼检查细胞来发现,也不能通过向培养基中加入抗*素控制。
5. 对细胞培养数据可靠性的影响:支原体污染会降低细胞系的有效性,使得细胞培养数据失去可靠性,无法为生命科学研究提供有意义的数据。
6. 预防和控制污染的必要性:定期进行支原体检测是细胞培养实验室进行自我质量监控的必要组成部分,有助于及时发现并控制污染,保证实验的准确性和重复性。
7. 避免细胞株受损:支原体污染可能导致细胞株受损,影响细胞株的质量和研究价值。及时检测和清*支原体污染有助于保护珍贵的细胞资源
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支原体去除试剂使用后,对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体,而对真核细胞几乎没有影响。然而,某些情况下,去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响,尤其是在去除剂作用期间。此外,如果去除剂的效果不彻底,可能会导致细胞再次被支原体污染。
需要注意的是,某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解,从而释放出支原体的DNA,这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此,在去除支原体后,建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测,以确保检测结果的准确性。
需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类:
1. 生物医药企业:生产涉及细胞培养的生物制品的公司,包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司:进行细胞产品的研发和生产的企业,需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构:从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构,需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位:使用细胞技术进行的医院或诊所,需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库:保存和供应细胞株的细胞库,需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司:提供生物技术服务的公司,如细胞培养、基因编辑等,需要确保服务过程中细胞的质量。
细胞被支原体污染了会有什么影响?
支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基。在细胞培养中,支原体污染是常见的问题,因此需要对细胞和培养基进行检测。细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床用细胞等都需要进行支原体检查,这通常包括培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)。同时,病毒类疫苗的病毒收获液、原液也采用培养法检查支原体,必要时,也可以采用指示细胞培养法筛选培养基。
此外,支原体检测的培养基推荐使用支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基等,这些培养基可用于检测药品和生物制品中的支原体。在进行支原体检测时,需要取培养物样品接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上。
因此,支原体检测的样本既可以是细胞,也可以是培养基,具体取决于检测的目的和方法。
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qPCR法,即定量聚合酶链式反应(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术,用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中,qPCR法的原理主要包括以下几个步骤:
1. DNA提取:首先从待测样本中提取DNA,这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。
2. 设计特异性引物:针对支原体的保守DNA序列,如16S rRNA基因,设计特异性的DNA引物。
3. 荧光标记探针:使用荧光标记的探针,该探针与目标DNA序列互补,能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。
4. Ct值确定:Ct值(阈值循环数)是指在PCR反应中,荧光信号强度超过预定阈值的循环次数。Ct值越低,表示样本中支原体DNA的量越多。
5. 定量分析:通过标准曲线法或相对定量法,将Ct值转换为支原体DNA的定量结果。
qPCR法的优势在于其高灵敏度和特异性,能够检测到非常低水平的支原体污染,并且可以在短时间内提供结果,这对于需要快速检测的生物制品生产和细胞培养质量控制非常重要
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