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Co IP免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验方法基于以下几个关键步骤：...

免疫沉淀基本参数

品牌
世途科生物
产品名称
免疫沉淀磁珠Protein A/G
有效期
12个月

免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验方法基于以下几个关键步骤：

1. 细胞裂解：首先，细胞或组织样本被裂解，以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。

2.抗体特异性结合：裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。

3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成抗体-蛋白质-RNA复合物。

4. 亲和介质捕获：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获这些抗体-蛋白质-RNA复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下与之结合的复合物。

5. 洗涤：捕获的复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。

6. RNA分离和分析：从珠子上洗脱或消化复合物，分离出RNA，并进行进一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量测序（RNA-Seq）。

免疫沉淀技术IP的应用有哪些？Co IP免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验步骤通常包括以下几个关键环节：

1. 细胞裂解：首先需要收集细胞并裂解它们，以释放细胞内的蛋白质。这通常通过添加含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液来完成，以防止蛋白质降解。

2. 裂解物上清：裂解后的细胞混合物通常需要通过离心来去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞，从而获得上清。

3. 抗体的添加：将特定于目标蛋白的抗体加入到裂解物中。这些抗体将特异性地结合到目标蛋白上。

4. 免疫复合物的形成：抗体与目标蛋白结合形成免疫复合物。

5. 免疫复合物的捕获：使用Protein A/G结合的磁珠来捕获免疫复合物。

6. 洗涤：捕获免疫复合物后，需要用裂解/洗涤缓冲液多次洗涤，以去除未结合的蛋白质和其他污染物。

7. 洗脱：免疫复合物可以通过加入SDS样品缓冲液进行洗脱，这将导致抗体和抗原变性并从珠子上释放下来，或者使用低pH缓冲液进行温和洗脱，以保持蛋白质的天然构象。

8. 分析：洗脱后的样品可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法进行分析，以验证目标蛋白的存在和状态。

Co IP免疫沉淀磁珠的选择免疫沉淀技术IP实验步骤。

ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述：

1. 交联：将细胞与交联剂（如1%甲醛）孵育，通常在室温下进行10-15分钟。

2. 终止交联：添加甘氨酸以终止交联反应，孵育5分钟。

3. 收集细胞：通过离心收集细胞，并用PBS洗涤以去除交联剂。

4. 细胞裂解：使用裂解缓冲液裂解细胞，释放染色质。

5. 染色质剪切：使用超声波或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段。

6. 免疫沉淀：将剪切后的染色质与特异性抗体孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。

7. 洗涤：用低盐、高盐和LiCl洗涤液洗涤磁珠，去除非特异性结合物。

8. 洗脱：用洗脱缓冲液洗脱DNA。

9. 逆转交联：用蛋白酶K处理，然后在65°C下加热过夜以逆转交联。

10. DNA纯化：使用商业试剂盒或标准酚/氯仿方法纯化DNA。

11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或进行测序以确定蛋白质结合位点。

免疫沉淀实验步骤：

1. 样品制备

a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱

免疫沉淀技术Co-IP是什么？

免疫沉淀RIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。

琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。

与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。

简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。

免疫沉淀IP技术选琼脂糖珠还是磁珠？Co IP免疫沉淀磁珠的选择

免疫沉淀技术ChIP实验步骤。Co IP免疫沉淀磁珠的选择

RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验设计需要考虑多个方面，以确保实验的准确性和可重复性。

1. 目标蛋白的选择：确定你想要研究的目标RNA结合蛋白（RBP）。

2. 阳性和阴性对照：设计实验时，需要包括阳性对照和阴性对照。

3. 细胞培养与裂解：选择合适的细胞类型进行培养。

4. 抗体孵育：将特异性抗体与细胞裂解液孵育，以形成抗体-蛋白质-RNA复合物。

5. 免疫沉淀：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子进行免疫沉淀，捕获抗体-蛋白质-RNA复合物。

6. 洗涤和分离：洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。从珠子上分离RNA，可能需要使用低pH缓冲液或蛋白酶K处理。

7. RNA分析：使用qPCR、Northern blot或RNA-Seq等方法分析沉淀下来的RNA。

8. 数据分析：对实验结果进行定量分析，比较不同样品之间的RNA水平。

9. 实验重复：为了确保结果的可靠性，实验应该进行至少三次重复。 Co IP免疫沉淀磁珠的选择

10. 技术验证：使用其他技术（如RNA-pull down或FISH）验证RIP实验结果。

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