所有反应孔背景信号好、Ct值都在19~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型,说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测,每份样本平行三次,结果分别如图2、图3、图4、图5所示,由图可见,每个样本的平行实验,其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂(20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺),涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对,具体操作过程:将取血管颠倒混匀数次,吸取200μL血液于。包装后的拭子应贮存在2℃ ~30℃,相对湿度40%~90%的无腐蚀性气体、通风良好、阴凉干燥、清洁的环境中。湖南泡沫口腔拭子批发
口腔拭子DNA保存液成分唾液DNA保存液,用于在室温下唾液DNA的收集,运输和储存,能保证唾液DNA在室温下长期保存,保存的DNA没有降解,保持完整的DNA,为各种需要DNA基因检测的分子实验,提供可靠的高质量的DNA样品。
产品名称:iCleanhcyTM唾液DNA保存液
产品信息:产品货号SP-100SP-500产品规格(每份)100ML500ML
销售信息(现货)
产品特点:
1)操作使用简单,安全。
2)唾液DNA样品在保存液存放,可在室温下贮存超过3年,不需要冷冻,为运输和存储提供方便,并**减**冷成本。
3)获得的唾液DNA质量好,产量高,可代替血液DNA来完成各种基因检测及分析实验。如:qPCR、NGS、SNP分析。
4)能**各种霉菌的生长,并能杀灭各种传染因子,特别是空气及呼吸道的传染细菌,可避免试验人员在处理样品时受到病人病 毒 细菌的传染
产品技术参数:唾液保存液大约可以保存50份唾液样品(根据所要收集的唾液量而变化)。在室温下(15°C–25°C)保存唾液完整的gDNA3年以上。每毫升唾液可获得3ug-60ug的DNA产量(样品不同,DNA产量有所不同)。提纯的DNA:A260/A280值大于或等于–。DNA长度≧23Kb。 贵州鼻拭子口腔拭子供应商家这款口腔拭子用起来超级便捷:**一体化设计,更容易操作。
本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术:近年来,随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用,成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中,血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是,由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物,例如血液中含有血红素,蛋白质,脂肪,抗凝剂等,唾液和口腔拭子含有蛋白质,脂肪,抗凝剂等,使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此,现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA,才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多,传统酚氯仿抽提法,高盐盐析法,模离心柱吸附法,磁珠法,等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞,将血红素物质释放出来,然后离心,清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞,释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。
本发明的特征在于:应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测,主要步骤如下。(1)将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀。(2)将步骤(1)中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,至沉淀完全散开,然后5000g离心30s,弃上清。(口腔拭子样本则无需进行此步骤)。(3)向步骤(2)所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1~2min;室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的基因组DNA;所述的核酸释放剂组成为20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺;所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2~图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。口腔拭子如果在使用的过程中出现过敏现象,请立即停止使用,严重时请及时就医。
口腔拭子DNA提取介绍所述iCleanhcy的DNA口腔细胞的试剂盒允许从人口腔拭子的基因组DNA的快速和有效的纯化。
DNA样本准备裂解液后,您可以在使用iCleanhcy不到15分钟纯化DNA技术。根据所使用的DNA纯化试剂盒,可以使用液体处理机器人单独或在自动化系统中处理样品。对于套件预期用途的iCleanhcy设计DNA口腔细胞试剂盒以允许从人颊细胞拭子或来自漱口水/或者唾液采集器手机人体唾液的沉淀细胞中分离以下量的基因组DNA。在加工前,样品可以在4°C下储存长达2周,而DNA产量或质量没有明显损失,不会降解。纯化的基因组DNA适用于下游应用,例如PCR,芯片.iCleanhcy?的DNA归口腔细胞培养基:在150微升的总体积在1-3毫微克/微升的浓度制作的基因组DNA的归一化产率。
iCleanhcy的DNA口腔细胞培养基:纯化的基因组DNA的6微克。重要提示:DNA产量各不相同,取决于几个因素,包括服用拭子的人的技术,供体是高还是低的脱落剂,以及使用的拭子类型。优点使用iCleanhcy的DNA口腔细胞的试剂盒,分离基因组DNA提供了以下优点:使用基于磁珠的技术分离基因组DNA,无需使用危险化学品,离心或真空歧管在样品制备和裂解后不到15分钟内。 这款口腔拭子采用国际通用的方便消灭细菌的纸塑包装。贵州鼻拭子口腔拭子供应商家
口腔拭子取样前要准备一杯清水,饮入约50ml清水充分洗漱口腔约10秒,吐掉;重复两三遍。湖南泡沫口腔拭子批发
深圳市华晨阳科技有限公司(Huachenyangtech)深圳市华晨阳科技有限公司是一家拥有生物医学领域自研技术,专注于基因检测临床应用、检测试剂及自动化仪器研发生产的****。中心点团队由生物学、医学、遗传学、生物信息学等领域的**人才组成。主营业务涵盖:核酸建库测序、荧光定量PCR、基因芯片等创新体外诊断试剂的自主研发生产、**研究、**早诊早筛、生殖医学、遗传病、微生物、病原体、慢病及健康管理等临床技术解决方案,以及生物药原材料研发制备。深圳华晨阳以成为精细医学国际化创新主体为目标,在深圳拥有一千多平米的综合性研发实验室与cGMP生产车间,以及**医学的研发实验室。华晨阳科技致力于生物医药、临床检测试剂的自主创新和国产化,凭借***低成本的产业优势,将大型人群队列样本转化为医学相关的基因大数据,为国内外生物产业提供更便捷更***的前沿生物信息技术服务。公司产品原研技术、规范生产、精细检测。采样拭子,口腔拭子,植绒拭子,植绒棉签,植绒采样棉签。 湖南泡沫口腔拭子批发
深圳市华晨阳科技有限公司是一家致力于核酸检测、分子诊断、医学检验、病毒检测等产品研发、生产、销售于一体的国家高新技术企业。公司拥有二十多项**,部分专利已经转化应用于市场。产品主要应用于基因检测、医疗机构、生物制药、大型甲等医院、出入境检验检疫、诊断试剂、疾控机构、刑侦法医鉴定等。近年来,公司不断加大自主研发投入,积极引进人才和技术,并与国内外多家科研机构、医学检验所以及三甲医院、基因检测公司、疾病预防控制中心等科研机构有着紧密合作,促进人类健康产业大发展。