HE染色观察细胞凋亡,凋亡检测中形态学方法是**直观、可靠的方法之一。对组织和各种细胞进行染色后,在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察,通过观察细胞的形态或染色的类型来判断凋亡的发生与否。细胞涂片或细胞甩片的制备:对于贴壁细胞,可将盖玻片放于培养器皿中,让培养细胞长于玻片上,然后用药物诱导细胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。对于悬浮细胞,用药物诱导细胞凋亡后,离心1000r/min收集细胞,用PBS洗2次,收集调整细胞数为1X105/ml,涂片或用离心甩片,用4%多聚甲醛固定5min;在光学显微镜下,贴壁细胞由原来的梭形或多角形变小、变圆,核呈蓝色或蓝黑色,胞浆呈淡红色,核固缩、破碎,形成凋亡小体等。悬浮细胞,整个细胞皱缩,核固缩,破碎,形成凋亡小体,染色质颜色加深等。科研常备实验操作之HE染色。江苏性价比高的HE染色公司
HE染色构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。江苏性价比高的HE染色公司肝脏组织HE染色如何观察。
HE染色多聚甲醛保存组织的注意事项:多聚甲醛放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
HE染色细胞浆染色原理:细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被***成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。HE染色,优先南京英瀚斯生物。
HE染色细胞核灰蓝原因:(1)组织处理温度过高、过热,在石蜡停留的时间过长;(2)固定时间太短,接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。对策:理论上来说,加热处理*在组织浸蜡步骤才使用,组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理,完成浸蜡处理后的组织,可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中,冷却凝固,以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好,脱水比较好能从低浓度的乙醇开始。肾脏组织HE染色如何观察。河南质量好的HE染色报告
HE染色是组织学、病理学教学与科研中比较基础、使用比较普遍的技术方法之一。江苏性价比高的HE染色公司
HE染色就是用苏木精和伊红对细胞内的核糖体和细胞质染色的方法。H:Hematoxylin,苏木精E:Eosin,伊红苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱染料染色的结构具有嗜碱。伊红(,E)是一种酸染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸染料染色的结构具有嗜酸。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,***入蒸馏水,就可染色。 很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行变则呈现嗜伊红浓染。 胶原纤维在老化和出现透明变时,伊红着色由浅变深。江苏性价比高的HE染色公司