企业商机
免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀(IP)实验中抗体的选择非常关键,因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。
1. 特异性:抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性,以避免与其他蛋白发生非特异性结合,导致假阳性结果。
2. 亲和力:抗体对目标蛋白的亲和力要足够高,以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。
3. 抗体类型:单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性,而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。
4. 应用验证:选择已经过免疫沉淀(IP)或相关应用(如Western blot, IHC)验证的抗体,这增加了实验成功的可能性。
5. 供应商信息:选择信誉良好的抗体供应商,并查看供应商提供的技术数据和客户评价,以帮助做出决策。
免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠?北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠

北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠,免疫沉淀

免疫沉淀Co-IP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
苏州蛋白免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀样本的制备。

北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠,免疫沉淀

免疫沉淀实验步骤:
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理:离心收集细胞(4℃, 1000g, 5 min),用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
b. 贴壁细胞样品处理:移去培养基,用PBS清洗细胞两遍;用细胞刮棒刮脱细胞,收集至1.5mL EP管内,按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液(裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail,使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×)。吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min;离心收集上清液(4℃, 14000g, 10 min),置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
4. 后续:磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)的实验方法通常包括以下步骤:
1. 样本准备
2. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。
3. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上,如琼脂糖珠或磁性微珠。
4. 免疫沉淀反应:将裂解液与特异性抗体(固定或未固定)混合,并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜,以允许抗体与目标蛋白质充分结合。
5. 固相支持物的回收:对于未固定的抗体,加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。
6. 洗涤:去除未结合的蛋白质和杂质,通常需要多次洗涤固相支持物。
7. 洗脱:使用适当的洗脱缓冲液(如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液)从固相支持物上洗脱免疫复合物。
8. 后续分析:对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等,以进一步分析目标蛋白质。
免疫沉淀和免疫共沉淀的区别?

北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠,免疫沉淀

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和纯化特定蛋白质的实验方法。
优点:
1. 特异性强:利用特异性抗体捕获目标蛋白,可以有效地从复杂的生物样本中分离出感兴趣的蛋白质。
2. 灵敏度高:可以检测到低丰度的蛋白质,包括瞬态或弱相互作用的蛋白质复合物。
3. 应用范围广:适用于多种生物样本,如细胞裂解物、组织提取物和生物流体。
4. 生物学洞察深入:能够揭示蛋白质之间的相互作用网络,有助于理解细胞内的信号传递和调控机制。
5. 可与其他技术联用:如与质谱(IP-MS)联用,可以准确鉴定蛋白质及其相互作用伙伴。
缺点:
1. 对抗体依赖性高:需要高亲和力和高特异性的抗体,抗体的质量直接影响实验结果。
2. 可能存在非特异性结合:样本中的其他蛋白质可能与抗体或固相支持物发生非特异性结合,导致背景噪音。
3. 可能影响蛋白质的天然状态:裂解和沉淀过程可能会改变蛋白质的构象和功能。
4. 实验重复性:需要多次实验来确保结果的可重复性和可靠性。
5. 样品处理:需要避免样品降解和非特异性结合,这可能需要使用蛋白酶抑制剂和适当的缓冲液条件。
免疫沉淀技术ChIP是什么?深圳蛋白免疫沉淀磁珠哪个公司好用

免疫沉淀技术ChIP的实验设计。北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠

免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
北京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠

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