关于免疫组化,抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。南京英瀚斯生物科技有限公司有设计免疫组化的实验哦!如果您对此有希望了解更多,可以与我们联系!免疫组化怎么做?步骤方法?云南免疫组化要多少钱
什么是免疫组化?免疫组化的原理是什么?
1、定义:用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。
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2、原理:根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 湖北小鼠免疫组化要多少钱英瀚斯生物为您详解免疫组化实验指南!
免疫组化如何才能充分脱蜡?
(1)蜡不溶于水,如果脱蜡不干净,少许蜡存留于切片上,将会引起染色不均匀、阳性物时隐时现、真假难辨、背景染色增加等。为了解决上述的问题,切片在染色前必须彻底脱蜡,目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯,因它脱蜡力强,脱蜡时间较短;
(2)脱蜡的时间要根据季节,室温和试剂的新鲜谋面是在不同。如果在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长。
(3)当天切的切片,烧烤2小时后进行染色,切片带有温度进行脱蜡这将可加速脱蜡的过程,如果预先切好烤好的切片,在染色前,还必须对切片进行加温10-20分钟,然后再行脱蜡,这样脱蜡速度加快,效果魁伟更好。总之,操作时应根据不同的季节,不同的室温,不同的试剂来决定,脱蜡的时间,原则上是要彻底、干净、完全地脱去切片上的蜡。
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做免疫组化时如何选择一抗?
1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合,就像导弹精确地命中目标一样。另一方面,即使是同一个抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2、应用范围的选择。有的一抗只能用于Westernblotting,或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等;甚至标明石蜡切片或冰冻切片。
3、种属反应性的选择(speciesreactivity)。这一点很重要,表明这种抗体可能存在种属差别,且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4、种属来源,一般兔来源的多是多克隆抗体;而小鼠来源的多是单克隆抗体,但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。
5、生产厂家的选择。
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免疫组化临床应用对“未分化”cancer的分类。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer细胞的起源特征不能分类,初步区分组织学类型用非特异性抗体,在其基础上再选用特异性抗体做进一步鉴定。如分化差的cancer可显示Vimentin或S-100蛋白,有时淋巴瘤可以表达上皮膜抗原,一些黑色素瘤表现出角蛋白,这同时也强调了在cancer诊断中应使用一组抗体而不是单个抗体。如果您有实验外包的需求,可以与我们南京英瀚斯生物进行联系,我们也有做免疫组化的服务!关于免疫组化的常见问题汇总。浙江靠谱免疫组化要多少钱
免疫组化流程是什么样的?云南免疫组化要多少钱
免疫组化的结果分析:
免疫组化实验通常需要设置阳性对照、阴性对照(或替代对照)(阳性对照是排除方法和实验系统有无问题;阴性对照与替代对照是排除有无非特异性染色)。一般情况下,阳性对照颜色的特点为:Ag定位,包浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。且染色的强度不同(颜色深浅不一);阴性对照的特点为:染色细胞与组织无区别,颜色具有弥散性,分布均匀。
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说明:免疫组化实验可以对结果进行定量分析,但要实验得到的必须是高质量的染色切片,要求背景染色浅且特异性染色较深,这样分析的结果才会比较准确。 云南免疫组化要多少钱