免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复,抗原修复的条件是什么?
(1)由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性。通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。
(2)修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高pH的等)。
(3)微波修复,我们一般用6min*4次,效果不错。
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免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性,无阳性信号,假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当,根据不同的抗原特点采用不同的修复方法,大多数抗体要求热修复,热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化,如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化,而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊,进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照,比较两者染色结果。若阳性对照有表达,表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达,则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题,应逐一查找原因。河南做得好的免疫组化多少钱免疫组化失败的原因?
免疫组化的抗原修复
很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高,抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联,从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化,例如蛋白酶K,胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉,高压锅,蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复:柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中,预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩,孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴,将染色盘置于室温下,让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次,每次2分钟。开始封闭步骤。
免疫组化有哪几种分类 ?
1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。
2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。
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3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(***)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 免疫组化样本如何处理?
免疫组化在临床应用中,还能及时准确的发现微小转移灶。英瀚斯生物专业做实验外包服务,一站式医学科研平台。采用常规病理方法难以检出的实体瘤转移称为微小转移灶。在常规组织切片中,辨别单个或几个转移性cancer细胞很难,淋巴结内窦性组织细胞增生与某些cancer的早期转移有时也不易区别,而采用免疫组化方法,有助于及时准确的发现微小(cancer)转移灶。对乳腺cancer而言主要是腋窝淋巴结的检测,淋巴结微转移患者预后差,这对进一步医疗和预后判断十分有意义。免疫组化IHC详细介绍!青海靠谱免疫组化是什么
病理报告中的免疫组化到底有什么作用?青海靠谱免疫组化是什么
免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色?
(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。
(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;
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(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;
(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;
(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;
(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。 青海靠谱免疫组化是什么