甘肃做得好的免疫组化怎么选择

医疗和预后有关的免疫组化。与医疗及预后有关的标记物主要分以下为三类:(1)cancer基因标记物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的过表达与cancer的扩散、分化、术后残存cancer灶呈正相关;乳腺cancer中表达C-erbB2的浸润性cancer患者预后差;肺cancer中突变型P53基因蛋白表达增高，PTEN基因表达减弱，提示cancer预后不良。(2)细胞增殖性标记物:cancer细胞增生是否活跃直接影响着临床的医疗与预后，如表皮生长因子受体(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可对cancer细胞的增生做出评价，表达指数越高，表明其增殖指数越活跃，恶性度增高，预后不良，其中以恶性淋巴瘤乳腺cancer较为明显;在对乳腺cancer的研究中发现Ki-67、EGFR阳性者，淋巴结转移率高，并与ji素受体的表达呈负相关。(3)类固醇ji素受体:如雌ji素受体(ER)、孕ji素受体(PR)等，应用更为范围广的的是子宫内膜cancer及乳腺cancer，如对乳腺cancer中ER、PR的检测，有助于决定临床医疗中是否需要加入内分泌ji素阻断医疗，并能判断预后，ER及PR阳性表达、原cancer基因(C-erbB-2)阴性表达病例对三苯氧胺等ji素医疗反应良好，而ERPR、C-erbB-2三种抗体均阴性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意义不大。英瀚斯生物实验外包，多种病理染色熟练掌握，可做免疫组化！甘肃做得好的免疫组化怎么选择

免疫组化的结果分析：

免疫组化实验通常需要设置阳性对照、阴性对照（或替代对照）（阳性对照是排除方法和实验系统有无问题；阴性对照与替代对照是排除有无非特异性染色）。一般情况下，阳性对照颜色的特点为：Ag定位，包浆、胞核、胞膜、间质具有结构性。且染色的强度不同（颜色深浅不一）；阴性对照的特点为：染色细胞与组织无区别，颜色具有弥散性，分布均匀。

英瀚斯生物可承接各类病理染色，包括免疫组化。

说明：免疫组化实验可以对结果进行定量分析，但要实验得到的必须是高质量的染色切片，要求背景染色浅且特异性染色较深，这样分析的结果才会比较准确。 江西做得好的免疫组化怎么选择免疫组化可以看什么？

免疫组化的抗原修复

很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉，高压锅，蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复：柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中，预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩，孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴，将染色盘置于室温下，让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分钟。开始封闭步骤。

免疫组化结果要如何分析？

 （1）阳性着色细胞计数法。在40*光镜下，随机选择不重叠的10个视野，机器或人工计数阳性着色细胞，每组3~6张不同动物组织切片，然后进行组间比较即可。

（2）灰密度分析法。可以通过在不同组别和不同动物组织切片上选择相同区域、相同条件下用image j进行灰密度分析，然后进行统计分析即可。

（3）评分法。用光学显微镜下对组织切片分别按染色程度（0~3分为阴性着色、淡黄色、浅褐色、深褐色）、阳性范围进行评分（1~4分为0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**终可以分数相加，再进行比较。对于以上这几种方法，各有利弊，请细心选择。要想得到正确结果的前提是你要做出着色均匀、背景很浅的高质量切片。

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免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色？ 

（1）缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。

（2）一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。

（3）内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色； 

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（4）非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果； 

（5）缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等； 

（6）适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要； 

（7）防止标本染色过程中出现干片，这容易增强非特异性着色。 免疫组化方法步骤是什么？江西做得好的免疫组化怎么选择

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免疫组化结果中的假阴性是指所有抗体标记的切片均呈阴性，无阳性信号，假阴性结果不是真实的反应。导致假阴性结果的原因有:(1)抗原修复方法选择不当，根据不同的抗原特点采用不同的修复方法，大多数抗体要求热修复，热修复又包括高压修复、微波修复及煮沸热修复;而对某些细胞内抗原和细胞间质抗原需要用酶消化，如表皮生长因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin则不用修复;(2)一抗本身的问题:一抗效价降低或失效。在免疫组化中染色结果的假阴性会导致错诊或漏诊，进而影响临床诊断及延误医疗。解决这一问题的可通过设立阳性对照，比较两者染色结果。若阳性对照有表达，表明试剂和染色体系及实验步骤均无问题;若阳性对照无表达，则检测过程中某一试剂或某个步骤存在问题，应逐一查找原因。甘肃做得好的免疫组化怎么选择