PEI在于可以应用于体内试验。当初试验经费很有限,被逼无奈只能放弃脂质体2000,选择PEI,以至于相当长的时间内,转染试验都不顺利。下面是几点关于PEI转染的注意要点:1.PEI的使用量可以参照脂质体2000的说明书,所用质粒尽量去内2.转染时,一定要把PEI+DMEM加入到质粒+DMEM中,顺序不可错,轻微混匀,静止20min3.转染后4小时,一定要换液!换含有FBS的完全培养液!因为PEI对细胞毒性太大4.如果后续试验涉及到稳定筛选,建议把血清浓度适当提高。PS:事实证明,PEI是可行的,已经做出稳定细胞系了。更多关于PEI转染试剂相关的信息,可咨询上海曼博生物医药科技有限公司!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!PEI转染试剂如何做残留检测?PolysciencesPEI转染试剂试用装低成本的选择
材料:质粒DNA指数生长的真核细胞PEI(聚乙烯亚胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI储存液(100μM):称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm滤膜过滤,储存于4℃备用。1×HBS(pH7.4):将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水,加入20ml1M的HEPES,调pH值到7.4,定容至1L,过滤(0.2μm滤膜)后储存于4℃备用。方法:1.细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!江苏贴壁细胞PEI转染试剂试用装用PEI转染试剂时,一般和DNA的比例是多少?
1、细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。2、制备PEI-DNA混合物:以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管,一管将质粒DNA(总量2-8μg为佳)加入240μLHBS中,混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混匀后室温静置20-30min。将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。注:每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的浓度一致。3、培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16h左右可以观测到报告基因的表达。如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!
准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences PEI相关内容欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!PEI MAX 是一款高度浓缩的粉剂,大量科学家选择PEI MAX ,在内部自行制备低成本高效益的PEI转染试剂。
注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。近期还有PEIfree申请活动,欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!哪里可以买到23966-1?福建贴壁细胞PEI转染试剂试用装
哪个品牌的PEI转染试剂比较好?PolysciencesPEI转染试剂试用装低成本的选择
对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。更多关于PEI转染试剂相关产品技术问题,欢迎咨询上海曼博生物!如想申请PEI试用装,请关注我们的公众号:Mine-bio,回复关键词“PEI申请”,即可参加!PolysciencesPEI转染试剂试用装低成本的选择
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【详情】稳定转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)...
【详情】1、细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺...
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