为了揭示NEO1、NET1以及RGMB如何组装成三元复合物,作者收集到复合物分辨率为3.25A晶体结构,并通过超速离心分析(AUC)和小角度X射线散射(SAXS)分析了“3-3”三聚体的溶液稳定性, 终确定了超级复合体3:3:3NEO1-NET1-RGMB的基本组成。“3-3”超级复合体的主体本质上是由NEO1和NET1之间的相互作用形成的。NET1是细长的且刚性的分子,使得与两个相邻NEO1分子接触,以弥合超复合物。冷冻电镜结果显示,有四个N连接上蔗糖,另外有四个位置通过非共价连接了八硫酸酯盐(SOS)分子,蔗糖八硫酸酯协助确认三元聚合物超级复合体比例。NET1和RGMB分子形成非常小的相互作用,同时也未观察到NET1与溶液中RGMA以及RGMB的相互作用。这也表明了NET1-NEO1相互作用是形成“3-3“超级复合体的驱动力。AVT致力服务注射剂行业,一直以来专注脂质体、脂肪乳、微纳米靶向制剂等递药体系。宁夏辅料蔗糖八硫酸酯钾如何购买
由于细胞可以在体内以依赖 NEO1 的方式同时遇到 RGM 和 NET1,作者探究细胞表面是否存在稳定的三元NEO1-NET1-RGM复合物,或者NET1和RGM是否会竞争结合NEO1。为了探究这两种区别,作者采用Proximity Ligation Assay(***)实验,将经过细胞表达并纯化的全长的NEO1与NETNTR以及全长的胞外RGMB进行相互培养,观察到遇到***现象,并且只有当NET1与RGMB非常接近且距离<40nm时才会产生。当RGMB突变为不可链接NET1时,***现象明显减少。结果表明,NEO1是连接NET1和RGMB所必需的,并且会在细胞表面形成三元复合物。湖北药用辅料蔗糖八硫酸酯钾现货蔗糖八硫酸酯钾盐与蔗糖八硫酸酯钠盐也许有的小伙伴并不是很熟悉这两样产品。
在细胞迁移和分化过程中,细胞的表面受体可以同时结合不同的配体,然而,对于如何整合这些细胞外信号的了解却比较少。当Netrin-1(NET1)结合配体时,Neogenin(NEO1)会充当具有吸引力的引导受体,但它也会通过排斥性导向分子(RGM)介导排斥。文章揭示,通过三元聚合物(NEO1-NET1-RGM)复合物的形成进而整合了细胞外的信号并触发了下游信号的相互沉默。作者通过NEO1-NET1-RGM结构揭示了存在于细胞膜中的“三聚体”超级组装,并且这个超级组装形成的三聚体会通过阻断RGM-NEO1复合物形成的信号以及NET1诱导下的NEO1胞外聚集,进而抑制RGMA介导的生长锥塌陷以及RGMa或NET1-NEO1介导的神经元迁移。这些结果验证了当两个具有相反功能的配体与单个受体同时结合时,不会导致竞争性结合,而是会形成降低其功能的超级复合物。
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结果:为了剖析通过RGM和NET1相互作用控制NEO1信号传导的分子机制,作者使用了表面等离子体共振(SPR)以及细胞表面结合实验确定了NET1-NEO1相互作用的 小结合区域,测试表明, 小复合物由NEO1的三个靠近膜的FN结构域(NEO1FN456)以及一个缺少了C端的NTR结构域的NET1(NET1NTR)组成,这也与之前的研究结果一致。 宁夏辅料蔗糖八硫酸酯钾如何购买