选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。使用超滤离心管时应注意保持样品干燥、无污染和清洁。北京10K超滤离心管价格
超滤离心管只需5到15分钟,即可对50到500L样本进行简便、可靠的浓缩与脱盐处理:快速处理样本。通常,回收率高于90%;备有低蛋白质结合的Omega、Bio-Inert或GHP滤膜可供选择。对应各种截留分子量,备有各种编码以供轻松识别的颜色可供选择。结构材料为低结合聚丙烯。超声焊接密封,防止侧流或密封不严。适用于配合1.5mL试管的标准离心转子。超滤离心管通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。100K超滤离心管价位超滤离心管在基础科学研究中也具有重要意义,如蛋白质结构解析、酵母遗传学等领域。
超滤管采用其特有的再生纤维素膜,定义为:一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子,即100kDa的球形蛋白用100k的再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据:(以0.5mL的AU0.5为例,其它型号截留分子量的选择原则一致,具体离心力和离心时间不同。截留分子量选小啦!看到这个表,你是否发现原来抱怨超滤管流速偏慢的根源来自对于截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子),在再生纤维素超滤膜体系内,选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是较佳选择,这样操作起来又快又好,既保证了样品回收率,又缩短了离心时间,大幅降低大分子损伤风险。
我用的是3500g,4度离心,时间可以自己控制,取决于你之后的浓缩体积,我一般是200ul左右。千万别一下离心时间太长,不同的蛋白浓缩的速度不同,有的需要长时间离心,有的则一下子就好。当然也和你的蛋白是否比较纯,所用的是什么buffer,还有蛋白的浓度有关系。所以离心时要先短些时间观察一下你的浓缩速度,不要一下子浓缩过了,甚至形成沉淀就得不偿失了。另外其实他们的管子都设计的是一次性使用,所以如果想重复使用,不要离得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重复使用时要看看管壁上有没有裂纹,现在的管子好像不如从前的结实了。超滤离心管还可用于生产工艺控制和质量监测,以确保产品符合标准要求。
超滤离心管,备有四种材质的超滤膜:聚醚砜、三醋酸纤维素、再生纤维素和Hydrosart,可根据不同要求灵活选用。 使用注意事项 (1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。 (2)新买来的超滤是干燥的,使用前加入超纯水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤管需要插在冰上预冷。 (3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至较低档,减小对膜的压力。超滤离心管可以去除混合物中的低分子量化合物,提高目标化合物的纯度。河南10K超滤离心管厂家有哪些
使用超滤离心管时应注意遵循正确的操作流程和实验室规范,并定期进行质量控制和评估。北京10K超滤离心管价格
超滤离心管的分子量选择:按照样品量和目标分子量选择适当的超滤离心管,为了得到较高的收率,所选滤膜的截留分子量MWCO建议选择所需截留分子大小的1/3左右,不超过目标分子量的一半。因为超滤膜上孔径是平均孔径,膜上的孔并非均匀,离心高压下也可能渗漏,因此截留孔径越小,流速越慢但截留比例更大。如果样本浓度低体积大,可选择较小容积的超滤管多次重复加样离心。如果同时需要脱盐和去除可溶小分子杂质,可将待浓缩样品稀释到超滤管较大容积再离心,重复2次可除去99%盐。避免过长时间或者过速离心,虽然优良品质的产品都有防死端设计,可避免过度离心造成膜表面干而造成不可逆吸附。北京10K超滤离心管价格