免疫共沉淀分析(Co-IP)与IP十分类似,基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体;但IP的目标是纯化单一抗原,而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。 在Co-IP实验中,已知抗原称为诱饵蛋白,与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等,蛋白间相互作用强度范围可能介于...
查看详细 >>免疫沉淀技术的实验方法通常包括以下步骤: 1. 样本准备 2. 细胞裂解:使用裂解缓冲液(含有蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解)裂解细胞,释放蛋白质。 3. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。 4. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用和蛋白质特性的重要方法。它具有一些明显的优点,但也存在一些局限性。 优点: 1. 特异性强:IP技术利用特异性抗体对目标蛋白进行捕获,因此具有很高的特异性。 2. 富集低丰度蛋白:可以从小量样本中富集低丰度的目标蛋白,有助于研究...
查看详细 >>细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起: 1. 扩增产物污染:PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理,极微量的污染就可能导致假阳性结果。 2. 引物设计不当:引物设计不够特异性,可能会与非目标序列发生反应,导致非特异性扩增。 3. 试剂质量问题:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳,可...
查看详细 >>免疫沉淀技术(Immunoprecipitation,简称IP)是一种生物学实验方法,用于从细胞或组织裂解物中分离和纯化特定蛋白质。这项技术依赖于抗体的高度特异性,通过抗体与目标蛋白质的结合,实现对目标蛋白质的富集和纯化。 具体操作步骤通常包括以下几个阶段:裂解细胞或组织,抗体与蛋白质结合,固相支持物的使用,免疫复合物的捕获,洗...
查看详细 >>免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。 琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。 与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,...
查看详细 >>免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。 琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。 与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,...
查看详细 >>免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。 琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。 与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,...
查看详细 >>巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒各有优缺点,具体哪个更好要根据实验需求和条件来决定。 1. 巢式PCR法通过两轮PCR扩增来提高检测的特异性和灵敏度。它的优点是: 2. 特异性强,可以减少假阳性结果。 3. 灵敏度高,可以检测到很低数量的支原体。 4. 通过设计多对引物,可以覆盖多种支原体种类。 ...
查看详细 >>免疫沉淀技术RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)是一种用于研究细胞内RNA与蛋白质相互作用的技术。RIP技术可以帮助我们了解转录后调控网络的动态过程,并发现miRNA等非编码RNA的调节靶点。 RIP技术的原理是利用针对特定RNA结合蛋白的抗体,将细胞内的RNA-蛋白质复合物沉淀下来。然后,可...
查看详细 >>细胞培养中支原体检测出现假阴性结果可能由以下原因引起: 1. 样本质量问题:如果采集的样本中含有抑制剂或者样本在处理、存储过程中出现问题,可能会影响PCR反应,导致假阴性。 2. 技术或操作问题:实验操作中的误差,如样本处理不当、试剂配制错误、仪器设备问题等,都可能导致假阴性结果。 3. 检测方法的局限性:某些检测方...
查看详细 >>免疫沉淀纯化所得抗原量低有多种原因, A. 纯化所得抗原量低 1. 抗原结合水平低 IP 应用中出现低抗原结合水平的可能原因有很多,结合反应所使用的溶液是重要原因之一。必须使用适合的缓冲液,有特定的pH和盐浓度,可能还需要添加互作所需的辅助因子。IP 或Co-IP 中用于纯化的抗体是影响得率的另一个重要因素。如果抗体...
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