二代测序的优势和劣势分别有哪些? 优势:能够同时得到大量的序列数据,相比于一代测序技术,通量提高了成千上万倍;单条序列成本非常低廉。 劣势:序列读长较短,Illumina平台为250-300bp,454平台也只有500bp左右;由于建库中利用了PCR富集序列,因此有一些含量较少的序列可能无法被大量扩增,造成一些信息的丢失,...
查看详细 >>二代测序——甲基化的定义和概念 定义:甲基化(methylation)是指从活性甲基化合物(如S-腺苷基甲硫氨酸)上将甲基催化转移到其他化合物的过程。在生物系统中,这是一种常见的化学修饰方式,主要涉及在DNA、RNA和蛋白质等生物大分子上添加甲基基团。 DNA甲基化 概念及位置:DNA甲基化主要是在DNA甲基转移酶(...
查看详细 >>一代、二代、三代测序的技术原理和技术特点分别是什么? 技术原理: 一代—双脱氧终止法 二代—桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像 三代—PacBio SMRT测序技术 技术特点: 一代—只能检测序列一致的PCR产物;读长可以较长,比如Sanger可以达到几百bp;通量低,一次只能检测少量的序列...
查看详细 >>二代测序技术的一些***研究进展① 疾病诊断与***领域 :消化系统**标志物检测:2024 年的**共识指出,二代测序(NGS)技术可同时检测消化系统**中的多种标志物,如错配修复基因变异、微卫星不稳定性(MSI)状态、**突变负荷(TMB)等,为**的精细***提供了更***、准确的信息。例如,MSI-H 的实体瘤患者可使用...
查看详细 >>二代测序—全外显子测序的应用领域 医学领域:1、疾病诊断:用于诊断各种遗传性疾病,包括单基因遗传病(如囊性纤维化、杜氏肌营养不良等)和复杂疾病(如**、心血管疾病等)。在**研究中,通过对**组织和正常组织进行全外显子测序,可以发现肿瘤细胞中的体细胞突变,这些突变可能是导致**发生、发展的关键因素,有助于医生制定个性化的治疗方案...
查看详细 >>二代测序的建库步骤③ 三、末端修复和加A尾(以DNA文库为例) 末端修复:经过片段化后的DNA末端可能是不平齐的,有5'-突出端或3'-突出端。末端修复反应可以利用T4DNA聚合酶、Klenow片段等酶,将这些末端补平,使其成为平末端。T4DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性,在合适的反应缓冲液和dN...
查看详细 >>什么样本可以做二代测序?① 1、血液样本 全血:这是最常见的样本类型之一。血液中含有白细胞,其细胞核内有完整的基因组DNA。通过提取白细胞中的DNA,可以进行全基因组测序、全外显子组测序等。例如,在遗传病的基因诊断中,抽取患者的全血,提取DNA后,对与疾病相关的基因或整个外显子组进行测序,以寻找致病突变。 血浆/血清...
查看详细 >>二代测序——蛋白质甲基化 概念及位置:蛋白质甲基化是指在蛋白质的氨基酸残基上添加甲基基团。常见的甲基化修饰位点包括精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)残基。 作用 1、调节蛋白质 - 蛋白质相互作用:例如,组蛋白(染色体的组成成分)的甲基化可以改变染色质的结构和功能,影响基因的可及性。当组蛋白 H3 的赖氨酸残基(如 ...
查看详细 >>一代、二代、三代测序的技术原理和技术特点分别是什么? 技术原理: 一代—双脱氧终止法 二代—桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像 三代—PacBio SMRT测序技术 技术特点: 一代—只能检测序列一致的PCR产物;读长可以较长,比如Sanger可以达到几百bp;通量低,一次只能检测少量的序列...
查看详细 >>什么样本可以做二代测序?④ 4、口腔样本 口腔拭子:通过刮取口腔黏膜细胞来获取样本。口腔拭子采集方便、无创,可用于DNA提取和基因检测。例如,在法医鉴定中,口腔拭子是常用的样本来源,用于个体身份识别和亲子关系鉴定等;在一些大规模的人群基因筛查项目中,也可以使用口腔拭子来收集样本。 5、粪便样本 粪便中含有肠道微...
查看详细 >>二代测序的应用领域有哪些? 基因组学研究:用于全基因组测序,快速获取物种的基因组序列信息,研究基因组结构、变异、进化等;进行全外显子组测序,重点关注编码蛋白质的外显子区域,发现与疾病相关的基因突变。 转录组学研究:通过对转录组进行测序,可分析基因的表达水平、可变剪接、新转录本发现等,有助于深入了解基因在不同生理和病理状态下...
查看详细 >>二代测序——甲基化的作用和检测方法有哪些? 作用 基因表达调控:DNA 甲基化通常与基因沉默有关。例如,在**发生过程中,某些抑*基因的启动子区域(调控基因转录起始的 DNA 序列)可能会发生高甲基化,导致这些基因无法正常表达,从而失去对肿瘤细胞生长的抑制作用。 发育调控:在胚胎发育过程中,DNA 甲基化模式的动态变...
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